中华肺部疾病杂志（电子版）
中華肺部疾病雜誌（電子版）
중화폐부질병잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF LUNG DISEASE（ELECTRONIC EDITION）
2014年
2期
16-20
,共5页
王艺%徐剑铖%毛梅%李秋梅%田静%苏磊
王藝%徐劍鋮%毛梅%李鞦梅%田靜%囌磊
왕예%서검성%모매%리추매%전정%소뢰
急性肺损伤%核仁素%脂多糖%肺泡巨噬细胞%肿瘤坏死因子-α%白介素-6
急性肺損傷%覈仁素%脂多糖%肺泡巨噬細胞%腫瘤壞死因子-α%白介素-6
급성폐손상%핵인소%지다당%폐포거서세포%종류배사인자-α%백개소-6
目的 建立气管内滴入核仁素shRNA表达载体的实验模型,观察其对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺泡巨噬细胞(AM)活化的影响,探讨AM膜核仁素在LPS致大鼠ALI中的作用及机制.方法 选择健康雄性SD大鼠40只,随机分为A组(空白对照组),B组(ALI组),C组(转染重组质粒pBS-U6.C23shRNA并ALI组),D组(转染对照质粒pBS-U6.ControlshRNA并ALI组).大鼠经尾静脉注射LPS以建立ALI模型,气管内滴入法转染重组质粒pBS-U6.C23shRNA表达载体,免疫印迹(Western blot)检测AM膜核仁素蛋白表达;核酸电泳迁移率实验(EMSA)检测AM中核因子(NF-κB)活性;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)表达.结果 转染pBS-U6.C23shRNA表达载体后可以显著下调AM膜核仁素蛋白表达;减轻肺病理损伤;降低NF-κB的活性以及肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6的含量.与A组相比,B组及D组的大鼠AM膜核仁素蛋白表达显著增加,组间有统计学差异(P＜0.01);C组大鼠AM膜核仁素蛋白表达明显下调,与B组相比,组间差异有统计学意义(P＜0.01);而D组与B组中的大鼠AM膜核仁素蛋白表达组间没有统计学差异(P＞0.05).经LPS处理后,各组大鼠AM中NF-κB活性显著增加,与A组相比,组间差异非常明显(P＜0.01).C组大鼠AM中NF-κB活性明显降低,与B组比较,差异显著(P＜0.05);而D组与B组比较,组间无明显差异(P＞0.05).经LPS诱导肺损伤后,显著增加了大鼠BALF中促炎因子TNF-α和IL-6的表达,各组和A组相比差异显著(P＜0.01);C组大鼠BALF中TNF-α和IL-6的含量显著降低,与B组相比差异显著(P＜0.01);而D组与B组相比,组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 气管内滴入法可以安全有效转染核仁素shRNA表达载体,抑制AM活化,减轻肺损伤,AM膜核仁素参与了LPS致大鼠ALI的发病过程.
目的 建立氣管內滴入覈仁素shRNA錶達載體的實驗模型,觀察其對脂多糖(LPS)誘導急性肺損傷(ALI)大鼠肺泡巨噬細胞(AM)活化的影響,探討AM膜覈仁素在LPS緻大鼠ALI中的作用及機製.方法 選擇健康雄性SD大鼠40隻,隨機分為A組(空白對照組),B組(ALI組),C組(轉染重組質粒pBS-U6.C23shRNA併ALI組),D組(轉染對照質粒pBS-U6.ControlshRNA併ALI組).大鼠經尾靜脈註射LPS以建立ALI模型,氣管內滴入法轉染重組質粒pBS-U6.C23shRNA錶達載體,免疫印跡(Western blot)檢測AM膜覈仁素蛋白錶達;覈痠電泳遷移率實驗(EMSA)檢測AM中覈因子(NF-κB)活性;酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測肺泡灌洗液(BALF)中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)錶達.結果 轉染pBS-U6.C23shRNA錶達載體後可以顯著下調AM膜覈仁素蛋白錶達;減輕肺病理損傷;降低NF-κB的活性以及肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6的含量.與A組相比,B組及D組的大鼠AM膜覈仁素蛋白錶達顯著增加,組間有統計學差異(P＜0.01);C組大鼠AM膜覈仁素蛋白錶達明顯下調,與B組相比,組間差異有統計學意義(P＜0.01);而D組與B組中的大鼠AM膜覈仁素蛋白錶達組間沒有統計學差異(P＞0.05).經LPS處理後,各組大鼠AM中NF-κB活性顯著增加,與A組相比,組間差異非常明顯(P＜0.01).C組大鼠AM中NF-κB活性明顯降低,與B組比較,差異顯著(P＜0.05);而D組與B組比較,組間無明顯差異(P＞0.05).經LPS誘導肺損傷後,顯著增加瞭大鼠BALF中促炎因子TNF-α和IL-6的錶達,各組和A組相比差異顯著(P＜0.01);C組大鼠BALF中TNF-α和IL-6的含量顯著降低,與B組相比差異顯著(P＜0.01);而D組與B組相比,組間差異無統計學意義(P＞0.05).結論 氣管內滴入法可以安全有效轉染覈仁素shRNA錶達載體,抑製AM活化,減輕肺損傷,AM膜覈仁素參與瞭LPS緻大鼠ALI的髮病過程.
목적 건립기관내적입핵인소shRNA표체재체적실험모형,관찰기대지다당(LPS)유도급성폐손상(ALI)대서폐포거서세포(AM)활화적영향,탐토AM막핵인소재LPS치대서ALI중적작용급궤제.방법 선택건강웅성SD대서40지,수궤분위A조(공백대조조),B조(ALI조),C조(전염중조질립pBS-U6.C23shRNA병ALI조),D조(전염대조질립pBS-U6.ControlshRNA병ALI조).대서경미정맥주사LPS이건립ALI모형,기관내적입법전염중조질립pBS-U6.C23shRNA표체재체,면역인적(Western blot)검측AM막핵인소단백표체;핵산전영천이솔실험(EMSA)검측AM중핵인자(NF-κB)활성;매련면역흡부법(ELISA)검측폐포관세액(BALF)중종류배사인자-α(TNF-α)화백개소-6(IL-6)표체.결과 전염pBS-U6.C23shRNA표체재체후가이현저하조AM막핵인소단백표체;감경폐병리손상;강저NF-κB적활성이급폐포관세액중TNF-α화IL-6적함량.여A조상비,B조급D조적대서AM막핵인소단백표체현저증가,조간유통계학차이(P＜0.01);C조대서AM막핵인소단백표체명현하조,여B조상비,조간차이유통계학의의(P＜0.01);이D조여B조중적대서AM막핵인소단백표체조간몰유통계학차이(P＞0.05).경LPS처리후,각조대서AM중NF-κB활성현저증가,여A조상비,조간차이비상명현(P＜0.01).C조대서AM중NF-κB활성명현강저,여B조비교,차이현저(P＜0.05);이D조여B조비교,조간무명현차이(P＞0.05).경LPS유도폐손상후,현저증가료대서BALF중촉염인자TNF-α화IL-6적표체,각조화A조상비차이현저(P＜0.01);C조대서BALF중TNF-α화IL-6적함량현저강저,여B조상비차이현저(P＜0.01);이D조여B조상비,조간차이무통계학의의(P＞0.05).결론 기관내적입법가이안전유효전염핵인소shRNA표체재체,억제AM활화,감경폐손상,AM막핵인소삼여료LPS치대서ALI적발병과정.
