中国酿造
中國釀造
중국양조
CHINA BREWING
2012年
11期
78-82
,共5页
付冠华%刘振华%王丹丹%周晨妍
付冠華%劉振華%王丹丹%週晨妍
부관화%류진화%왕단단%주신연
黑曲霉%木聚糖酶%克隆%表达%酶学性质
黑麯黴%木聚糖酶%剋隆%錶達%酶學性質
흑곡매%목취당매%극륭%표체%매학성질
利用RT-PCR技术从黑曲霉(Aspergillus niger) XZ-3S中成功克隆出木聚糖酶基因(xynZF-2)的cDNA序列(Genbank登录号为:JQ700382).该基因核苷酸序列阅读框全长678bp,编码225个氨基酸,其中成熟肽为107个氨基酸.以重组质粒pUCm-T-xynZF-2为模板,扩增得到编码xynZF-2成熟肽的cDNA片段(624bp).将其与表达载体pET-28a连接,构建重组表达载体pET-28a-xynZF-2,并转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL2 1(DE3),获得重组工程菌BL21/xynZF-2.经IPTG诱导表达,木聚糖酶的的比酶活最高可达42.33U/mg.重组表达的木聚糖酶最适反应温度为40℃,最适反应pH为5.0,在碱性条件下具有良好的稳定性.Fe3+对酶的激活作用最为明显.
利用RT-PCR技術從黑麯黴(Aspergillus niger) XZ-3S中成功剋隆齣木聚糖酶基因(xynZF-2)的cDNA序列(Genbank登錄號為:JQ700382).該基因覈苷痠序列閱讀框全長678bp,編碼225箇氨基痠,其中成熟肽為107箇氨基痠.以重組質粒pUCm-T-xynZF-2為模闆,擴增得到編碼xynZF-2成熟肽的cDNA片段(624bp).將其與錶達載體pET-28a連接,構建重組錶達載體pET-28a-xynZF-2,併轉化大腸桿菌(Escherichia coli) BL2 1(DE3),穫得重組工程菌BL21/xynZF-2.經IPTG誘導錶達,木聚糖酶的的比酶活最高可達42.33U/mg.重組錶達的木聚糖酶最適反應溫度為40℃,最適反應pH為5.0,在堿性條件下具有良好的穩定性.Fe3+對酶的激活作用最為明顯.
이용RT-PCR기술종흑곡매(Aspergillus niger) XZ-3S중성공극륭출목취당매기인(xynZF-2)적cDNA서렬(Genbank등록호위:JQ700382).해기인핵감산서렬열독광전장678bp,편마225개안기산,기중성숙태위107개안기산.이중조질립pUCm-T-xynZF-2위모판,확증득도편마xynZF-2성숙태적cDNA편단(624bp).장기여표체재체pET-28a련접,구건중조표체재체pET-28a-xynZF-2,병전화대장간균(Escherichia coli) BL2 1(DE3),획득중조공정균BL21/xynZF-2.경IPTG유도표체,목취당매적적비매활최고가체42.33U/mg.중조표체적목취당매최괄반응온도위40℃,최괄반응pH위5.0,재감성조건하구유량호적은정성.Fe3+대매적격활작용최위명현.
