中国酿造
中國釀造
중국양조
CHINA BREWING
2013年
3期
122-125
,共4页
陆宁%柳帅%张玉洁%林凌
陸寧%柳帥%張玉潔%林凌
륙저%류수%장옥길%림릉
枯草芽孢杆菌%内切葡聚糖酶%263丙氨酸位点%突变
枯草芽孢桿菌%內切葡聚糖酶%263丙氨痠位點%突變
고초아포간균%내절포취당매%263병안산위점%돌변
研究通过对枯草芽孢杆菌内切葡聚糖酶celA进行三级结构模拟分析,发现其263位丙氨酸残基与底物纤维三糖间存在一定的作用；利用定点突变技术celA 263丙氨酸残基位点进行了不同的替换.结果显示野生酶的263位点丙氨酸(A263)突变为酪氨酸(A263Y)、异亮氨酸(A263I)、丝氨酸(A263S)和缬氨酸(A263V)后,其水解圈活性和CMC活力均大幅下降；DNS法测定的CMC活力分别由野生型的133.0U/L下降为A263Y 13.7U/L,A263I 36.1U/L,A263S 29.8U/L和A263V 19.6U/L.通过进一步的蛋白质精细结构模拟解析发现,263丙氨酸残基位点处于该蛋白活性口袋的内表面,为底物通道的结构区域,其羰基与底物糖基吡喃环上的羟基形成了分子间氢键.该氢键的形成可能对维持底物构象,正确引导底物在活性口袋中的定位起重要作用.该研究为诠释蛋白空间结构与其催化活性的内在联系奠定了一定的理论基础.
研究通過對枯草芽孢桿菌內切葡聚糖酶celA進行三級結構模擬分析,髮現其263位丙氨痠殘基與底物纖維三糖間存在一定的作用；利用定點突變技術celA 263丙氨痠殘基位點進行瞭不同的替換.結果顯示野生酶的263位點丙氨痠(A263)突變為酪氨痠(A263Y)、異亮氨痠(A263I)、絲氨痠(A263S)和纈氨痠(A263V)後,其水解圈活性和CMC活力均大幅下降；DNS法測定的CMC活力分彆由野生型的133.0U/L下降為A263Y 13.7U/L,A263I 36.1U/L,A263S 29.8U/L和A263V 19.6U/L.通過進一步的蛋白質精細結構模擬解析髮現,263丙氨痠殘基位點處于該蛋白活性口袋的內錶麵,為底物通道的結構區域,其羰基與底物糖基吡喃環上的羥基形成瞭分子間氫鍵.該氫鍵的形成可能對維持底物構象,正確引導底物在活性口袋中的定位起重要作用.該研究為詮釋蛋白空間結構與其催化活性的內在聯繫奠定瞭一定的理論基礎.
연구통과대고초아포간균내절포취당매celA진행삼급결구모의분석,발현기263위병안산잔기여저물섬유삼당간존재일정적작용；이용정점돌변기술celA 263병안산잔기위점진행료불동적체환.결과현시야생매적263위점병안산(A263)돌변위락안산(A263Y)、이량안산(A263I)、사안산(A263S)화힐안산(A263V)후,기수해권활성화CMC활력균대폭하강；DNS법측정적CMC활력분별유야생형적133.0U/L하강위A263Y 13.7U/L,A263I 36.1U/L,A263S 29.8U/L화A263V 19.6U/L.통과진일보적단백질정세결구모의해석발현,263병안산잔기위점처우해단백활성구대적내표면,위저물통도적결구구역,기탄기여저물당기필남배상적간기형성료분자간경건.해경건적형성가능대유지저물구상,정학인도저물재활성구대중적정위기중요작용.해연구위전석단백공간결구여기최화활성적내재련계전정료일정적이론기출.
