广东畜牧兽医科技
廣東畜牧獸醫科技
엄동축목수의과기
GUANDONG JOURNAL OF ANIMAL AND VETERINARY SCIENCE
2014年
1期
28-31
,共4页
敖艳华%穆光慧%郭沈涛%齐冬梅%张毓金
敖豔華%穆光慧%郭瀋濤%齊鼕梅%張毓金
오염화%목광혜%곽침도%제동매%장육금
猪圆环病毒%荧光定量PCR%TaqMan探针
豬圓環病毒%熒光定量PCR%TaqMan探針
저원배병독%형광정량PCR%TaqMan탐침
通过克隆2型猪圆环病毒(PCV2)的开放阅读框2(0RF2)基因编码其核衣壳蛋白(Cap)的一段靶序列,构建重组质粒作为标准阳性模板.根据GenBank中的靶序列设计一对引物和一条TaqMan探针.对PCR反应条件优化后,对构建的标准阳性模板定量,然后1 0×倍比稀释进行荧光定量PCR(qPCR)扩增并制作标准曲线,初步建立了PCV2检测的qPCR方法.结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×102拷贝/μ L,线性范围为101 ～ 109,达9个数量级,并且具有很好的特异性.对起始浓度为1.0×108、1.0× 106、1.0×104拷贝/μL的标准品的最终实际测得CT均值分别为12.77、19.72和26.89;变异系数分别为0.25％、0.10％和0.13％,均小于1％,说明此方法具有良好的准确性和重复性.
通過剋隆2型豬圓環病毒(PCV2)的開放閱讀框2(0RF2)基因編碼其覈衣殼蛋白(Cap)的一段靶序列,構建重組質粒作為標準暘性模闆.根據GenBank中的靶序列設計一對引物和一條TaqMan探針.對PCR反應條件優化後,對構建的標準暘性模闆定量,然後1 0×倍比稀釋進行熒光定量PCR(qPCR)擴增併製作標準麯線,初步建立瞭PCV2檢測的qPCR方法.結果錶明,該方法檢測靈敏度可達1.0×102拷貝/μ L,線性範圍為101 ～ 109,達9箇數量級,併且具有很好的特異性.對起始濃度為1.0×108、1.0× 106、1.0×104拷貝/μL的標準品的最終實際測得CT均值分彆為12.77、19.72和26.89;變異繫數分彆為0.25％、0.10％和0.13％,均小于1％,說明此方法具有良好的準確性和重複性.
통과극륭2형저원배병독(PCV2)적개방열독광2(0RF2)기인편마기핵의각단백(Cap)적일단파서렬,구건중조질립작위표준양성모판.근거GenBank중적파서렬설계일대인물화일조TaqMan탐침.대PCR반응조건우화후,대구건적표준양성모판정량,연후1 0×배비희석진행형광정량PCR(qPCR)확증병제작표준곡선,초보건립료PCV2검측적qPCR방법.결과표명,해방법검측령민도가체1.0×102고패/μ L,선성범위위101 ～ 109,체9개수량급,병차구유흔호적특이성.대기시농도위1.0×108、1.0× 106、1.0×104고패/μL적표준품적최종실제측득CT균치분별위12.77、19.72화26.89;변이계수분별위0.25％、0.10％화0.13％,균소우1％,설명차방법구유량호적준학성화중복성.
