CAJ | 학술논문

目的:通过siRNA介导的RNA干扰技术沉默类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)mTORC2的特异组成蛋白RICTOR的表达,观察其对细胞活力的影响.方法:组织块法培养RA-FLS.应用阳离子脂质体转染的方法,把化学合成的特异性RICTOR siRNA转染RA-FLS,并以转染非特异性siRNA作为阴性对照.利用荧光定量PCR法分析转染24h后细胞RICTOR mRNA表达水平的变化；Western blotting法分析转染48和72 h后细胞RICTOR蛋白表达水平的变化；以噻唑蓝(MTr)比色法检测转染成纤维样滑膜细胞不同时间(24、48和72h) RICTOR siRNA对细胞活力的影响.结果:荧光定量PCR结果显示特异性RICTOR siRNA转染组与对照组相比,细胞中RICTOR的mRNA表达水平显著下调,24h干扰效率达78.3％±63.71％ (P ＜0.01).Western blotting结果显示与对照组相比,RICTOR siRNA转染组48 h和72 h后RICTOR蛋白表达水平明显降低,沉默效率分别为92.48％±6.14％和98.57％±1.40％(均P＜0.01).MTT结果显示,早期(24和48 h)RICTOR siRNA转染组与阴性对照组细胞存活率比较无显著差异；72 h后,RICTOR siRNA转染组与阴性对照相比,细胞活力明显降低,抑制率为90.14％±1.90％ (P＜0.01).结论:转染特异性RICTOR siRNA可降低RA-FLS的活力,提示mTORC2可能与RA-FLS的生长有关.
목적:통과siRNA개도적RNA간우기술침묵류풍습관절염(RA)성섬유양활막세포(FLS)mTORC2적특이조성단백RICTOR적표체,관찰기대세포활력적영향.방법:조직괴법배양RA-FLS.응용양리자지질체전염적방법,파화학합성적특이성RICTOR siRNA전염RA-FLS,병이전염비특이성siRNA작위음성대조.이용형광정량PCR법분석전염24h후세포RICTOR mRNA표체수평적변화；Western blotting법분석전염48화72 h후세포RICTOR단백표체수평적변화；이새서람(MTr)비색법검측전염성섬유양활막세포불동시간(24、48화72h) RICTOR siRNA대세포활력적영향.결과:형광정량PCR결과현시특이성RICTOR siRNA전염조여대조조상비,세포중RICTOR적mRNA표체수평현저하조,24h간우효솔체78.3％±63.71％ (P ＜0.01).Western blotting결과현시여대조조상비,RICTOR siRNA전염조48 h화72 h후RICTOR단백표체수평명현강저,침묵효솔분별위92.48％±6.14％화98.57％±1.40％(균P＜0.01).MTT결과현시,조기(24화48 h)RICTOR siRNA전염조여음성대조조세포존활솔비교무현저차이；72 h후,RICTOR siRNA전염조여음성대조상비,세포활력명현강저,억제솔위90.14％±1.90％ (P＜0.01).결론:전염특이성RICTOR siRNA가강저RA-FLS적활력,제시mTORC2가능여RA-FLS적생장유관.