CAJ | 학술논문

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(roTOR)信号通路在巨噬细胞自体吞噬以及动脉粥样硬化斑块不稳定中的作用.方法:利用Akt抑制剂康士得(20 lμmol/L)、mTOR抑制剂雷帕霉素(10 nmoL/L)及mTOR-siRNA(30 nmol/L)体外处理小鼠RAW 264.7巨噬细胞株48 h后,透射电镜观察巨噬细胞自噬体的变化,细胞免疫荧光法及Western blotting法检测微管相关蛋白LC3-II表达,实时荧光定量qRT-PCR和Western blotting法检测Akt、mTOR及自噬相关蛋白Beclin 1的表达,ELISA检测巨噬细胞分泌炎症因子水平.体内实验中,24只雄性新西兰兔给予球囊损伤+1％胆固醇喂养8周,然后随机分为对照组、康士得(1.0 mg.kg-1.d-1)组和雷帕霉素(0.5 mg.kg-1.d-1)组,每组8只,干预4周.血管内超声(IVUS)检测斑块的影像学特征,透射电镜观察斑块中巨噬细胞超微结构的改变,免疫荧光法检测微管相关蛋白LC3-II表达,免疫组织化学法检测巨噬细胞Akt和mTOR的蛋白表达.结果:与对照组比较,康士得、雷帕霉素及mTOR-siRNA干预巨噬细胞后,透射电镜下观察到自噬体明显增多,微管相关蛋白LC3-II和自噬相关蛋白Beclin 1的表达水平明显上调,而Akt及mTOR的mRNA及蛋白表达水平明显减少,巨噬细胞分泌的IL-10明显降低,而IFN-γ的分泌显著增加.体内实验:IVUS显示,与对照组比较,康士得组及雷帕霉素组的外弹性膜面积(EEMA)、斑块面积(PA)及斑块负荷(PB)明显减少,透射电镜下观察到巨噬细胞中自噬体增加,组织免疫荧光法示LC3-II明显增加,HE染色显示斑块纤维帽的厚度明显增加,内、中膜厚度显著减低,组织免疫组化染色显示巨噬细胞RAM-11及p-mTOR染色显著减少.结论:选择性抑制PI3 K/Akt/mTOR信号通路能诱导巨噬细胞自噬,减少斑块巨噬细胞的浸润,抑制炎症反应进而稳定动脉粥样硬化易损斑块.
목적:탐토린지선기순3-격매(PI3K)/단백격매B(Akt)/포유동물뢰파매소파단백(roTOR)신호통로재거서세포자체탄서이급동맥죽양경화반괴불은정중적작용.방법:이용Akt억제제강사득(20 lμmol/L)、mTOR억제제뢰파매소(10 nmoL/L)급mTOR-siRNA(30 nmol/L)체외처리소서RAW 264.7거서세포주48 h후,투사전경관찰거서세포자서체적변화,세포면역형광법급Western blotting법검측미관상관단백LC3-II표체,실시형광정량qRT-PCR화Western blotting법검측Akt、mTOR급자서상관단백Beclin 1적표체,ELISA검측거서세포분비염증인자수평.체내실험중,24지웅성신서란토급여구낭손상+1％담고순위양8주,연후수궤분위대조조、강사득(1.0 mg.kg-1.d-1)조화뢰파매소(0.5 mg.kg-1.d-1)조,매조8지,간예4주.혈관내초성(IVUS)검측반괴적영상학특정,투사전경관찰반괴중거서세포초미결구적개변,면역형광법검측미관상관단백LC3-II표체,면역조직화학법검측거서세포Akt화mTOR적단백표체.결과:여대조조비교,강사득、뢰파매소급mTOR-siRNA간예거서세포후,투사전경하관찰도자서체명현증다,미관상관단백LC3-II화자서상관단백Beclin 1적표체수평명현상조,이Akt급mTOR적mRNA급단백표체수평명현감소,거서세포분비적IL-10명현강저,이IFN-γ적분비현저증가.체내실험:IVUS현시,여대조조비교,강사득조급뢰파매소조적외탄성막면적(EEMA)、반괴면적(PA)급반괴부하(PB)명현감소,투사전경하관찰도거서세포중자서체증가,조직면역형광법시LC3-II명현증가,HE염색현시반괴섬유모적후도명현증가,내、중막후도현저감저,조직면역조화염색현시거서세포RAM-11급p-mTOR염색현저감소.결론:선택성억제PI3 K/Akt/mTOR신호통로능유도거서세포자서,감소반괴거서세포적침윤,억제염증반응진이은정동맥죽양경화역손반괴.