中华肝脏外科手术学电子杂志
中華肝髒外科手術學電子雜誌
중화간장외과수술학전자잡지
CHINESE JOURNAL OF HEPATIC SURGERY(ELECTRONIC EDITION)
2013年
2期
113-118
,共6页
法镇中%江勇%谭玉林%吴宝强%石亮荣
法鎮中%江勇%譚玉林%吳寶彊%石亮榮
법진중%강용%담옥림%오보강%석량영
癌,胰腺管%受体,表皮生长因子%慢病毒%小干扰核糖核酸%细胞增殖%细胞凋亡%细胞周期
癌,胰腺管%受體,錶皮生長因子%慢病毒%小榦擾覈糖覈痠%細胞增殖%細胞凋亡%細胞週期
암,이선관%수체,표피생장인자%만병독%소간우핵당핵산%세포증식%세포조망%세포주기
目的探讨利用慢病毒介导小干扰核糖核酸(siRNA)沉默表皮生长因子受体(EGFR)基因的可行性及其对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法构建慢病毒表达载体LV-shEGFR,包装慢病毒表达载体及制备慢病毒颗粒EGFR-shRNA.实验分为Panc-1 组(空白组)、绿色荧光蛋白(GFP)-Panc-1 组(对照组)及siEGFR-Panc-1 组(干扰组)共3 组.空白组使用未经处理的对数生长期的胰腺癌细胞株Panc-1 细胞,对照组使用不含siRNA 片段的慢病毒颗粒及干扰组使用制备好的EGFR-shRNA 慢病毒颗粒感染对数生长期的Panc-1 细胞.采用实时聚合酶链反应(real-time PCR)检测EGFR 基因表达量(以与β- 肌动蛋白相对浓度比值表示),采用蛋白质印迹法(Western-blot)检测细胞中EGFR 蛋白表达(以灰度值表示),采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡情况.3 组EGFR 表达、吸光度(A)值、细胞凋亡率、细胞周期比较采用单因素方差分析和t 检验.结果干扰组EGFR 基因相对含量为0.20±0.04,明显低于对照组(1.00±0.15)及空白组(1.13±0.13),差异有统计学意义(LSD-t=7.865,7.668;P<0.05).干扰组EGFR 蛋白表达量为0.185±0.009,与对照组(0.801±0.087)及空白组(0.825±0.092)相比,干扰组EGFR 蛋白表达明显降低(LSD-t =4.216,3.975;P<0.05).干扰组细胞增殖受抑制,生长速度较对照组生长缓慢.干扰组G2/M 期细胞比率为(8.87±0.29)%,与空白组(20.00±1.88)%和对照组(21.48±2.13)%比较明显减少,比较差异有统计学意义(LSD-t=2.015,2.323;P<0.05),干扰组S 期细胞比率为(50.97±3.04)%,与空白组(36.67±6.18)%和对照组(39.91±2.09)%比较明显增加,比较差异有统计学意义(LSD-t=1.987,2.251;P<0.05).干扰组细胞凋亡率为(18.4±2.3)%明显高于对照组(7.4±1.4)%和空白组(7.7±1.2)%,比较差异有统计学意义(LSD-t=2.585,2.667;P<0.05).结论慢病毒介导siRNA 可以沉默EGFR 基因,抑制胰腺癌细胞增殖,阻滞细胞在S 期和促进细胞凋亡.
目的探討利用慢病毒介導小榦擾覈糖覈痠(siRNA)沉默錶皮生長因子受體(EGFR)基因的可行性及其對胰腺癌細胞增殖和凋亡的影響.方法構建慢病毒錶達載體LV-shEGFR,包裝慢病毒錶達載體及製備慢病毒顆粒EGFR-shRNA.實驗分為Panc-1 組(空白組)、綠色熒光蛋白(GFP)-Panc-1 組(對照組)及siEGFR-Panc-1 組(榦擾組)共3 組.空白組使用未經處理的對數生長期的胰腺癌細胞株Panc-1 細胞,對照組使用不含siRNA 片段的慢病毒顆粒及榦擾組使用製備好的EGFR-shRNA 慢病毒顆粒感染對數生長期的Panc-1 細胞.採用實時聚閤酶鏈反應(real-time PCR)檢測EGFR 基因錶達量(以與β- 肌動蛋白相對濃度比值錶示),採用蛋白質印跡法(Western-blot)檢測細胞中EGFR 蛋白錶達(以灰度值錶示),採用噻唑藍(MTT)比色法檢測細胞增殖情況,採用流式細胞儀檢測細胞週期及細胞凋亡情況.3 組EGFR 錶達、吸光度(A)值、細胞凋亡率、細胞週期比較採用單因素方差分析和t 檢驗.結果榦擾組EGFR 基因相對含量為0.20±0.04,明顯低于對照組(1.00±0.15)及空白組(1.13±0.13),差異有統計學意義(LSD-t=7.865,7.668;P<0.05).榦擾組EGFR 蛋白錶達量為0.185±0.009,與對照組(0.801±0.087)及空白組(0.825±0.092)相比,榦擾組EGFR 蛋白錶達明顯降低(LSD-t =4.216,3.975;P<0.05).榦擾組細胞增殖受抑製,生長速度較對照組生長緩慢.榦擾組G2/M 期細胞比率為(8.87±0.29)%,與空白組(20.00±1.88)%和對照組(21.48±2.13)%比較明顯減少,比較差異有統計學意義(LSD-t=2.015,2.323;P<0.05),榦擾組S 期細胞比率為(50.97±3.04)%,與空白組(36.67±6.18)%和對照組(39.91±2.09)%比較明顯增加,比較差異有統計學意義(LSD-t=1.987,2.251;P<0.05).榦擾組細胞凋亡率為(18.4±2.3)%明顯高于對照組(7.4±1.4)%和空白組(7.7±1.2)%,比較差異有統計學意義(LSD-t=2.585,2.667;P<0.05).結論慢病毒介導siRNA 可以沉默EGFR 基因,抑製胰腺癌細胞增殖,阻滯細胞在S 期和促進細胞凋亡.
목적탐토이용만병독개도소간우핵당핵산(siRNA)침묵표피생장인자수체(EGFR)기인적가행성급기대이선암세포증식화조망적영향.방법구건만병독표체재체LV-shEGFR,포장만병독표체재체급제비만병독과립EGFR-shRNA.실험분위Panc-1 조(공백조)、록색형광단백(GFP)-Panc-1 조(대조조)급siEGFR-Panc-1 조(간우조)공3 조.공백조사용미경처리적대수생장기적이선암세포주Panc-1 세포,대조조사용불함siRNA 편단적만병독과립급간우조사용제비호적EGFR-shRNA 만병독과립감염대수생장기적Panc-1 세포.채용실시취합매련반응(real-time PCR)검측EGFR 기인표체량(이여β- 기동단백상대농도비치표시),채용단백질인적법(Western-blot)검측세포중EGFR 단백표체(이회도치표시),채용새서람(MTT)비색법검측세포증식정황,채용류식세포의검측세포주기급세포조망정황.3 조EGFR 표체、흡광도(A)치、세포조망솔、세포주기비교채용단인소방차분석화t 검험.결과간우조EGFR 기인상대함량위0.20±0.04,명현저우대조조(1.00±0.15)급공백조(1.13±0.13),차이유통계학의의(LSD-t=7.865,7.668;P<0.05).간우조EGFR 단백표체량위0.185±0.009,여대조조(0.801±0.087)급공백조(0.825±0.092)상비,간우조EGFR 단백표체명현강저(LSD-t =4.216,3.975;P<0.05).간우조세포증식수억제,생장속도교대조조생장완만.간우조G2/M 기세포비솔위(8.87±0.29)%,여공백조(20.00±1.88)%화대조조(21.48±2.13)%비교명현감소,비교차이유통계학의의(LSD-t=2.015,2.323;P<0.05),간우조S 기세포비솔위(50.97±3.04)%,여공백조(36.67±6.18)%화대조조(39.91±2.09)%비교명현증가,비교차이유통계학의의(LSD-t=1.987,2.251;P<0.05).간우조세포조망솔위(18.4±2.3)%명현고우대조조(7.4±1.4)%화공백조(7.7±1.2)%,비교차이유통계학의의(LSD-t=2.585,2.667;P<0.05).결론만병독개도siRNA 가이침묵EGFR 기인,억제이선암세포증식,조체세포재S 기화촉진세포조망.
