河南农业科学
河南農業科學
하남농업과학
JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
9期
133-137
,共5页
卢清侠%王世红%金前跃%李清州%郝慧芳%张改平
盧清俠%王世紅%金前躍%李清州%郝慧芳%張改平
로청협%왕세홍%금전약%리청주%학혜방%장개평
口蹄疫%3D聚合酶%T细胞表位重组蛋白%原核表达%疫苗佐剂
口蹄疫%3D聚閤酶%T細胞錶位重組蛋白%原覈錶達%疫苗佐劑
구제역%3D취합매%T세포표위중조단백%원핵표체%역묘좌제
为获得具有抗原性的口蹄疫病毒(FMDV) 3D蛋白N端T细胞表位的重组表达蛋白,根据FMDV3D蛋白前115位氨基酸序列,设计优化并人工合成相应的核酸序列,将其克隆至pET- 28a中,构建原核表达质粒pET28a - 115,并将重组质粒转化至BL21 (DE3)细胞.经IPTG诱导后,收集菌液进行SDS-PAGE和Western - bolt鉴定,结果显示,在16 kD处有一条明显的蛋白表达条带.对表达产物进行可溶性分析,结果表达蛋白50％为可溶性蛋白,经Ni- NTA亲和层析纯化后获得了较高浓度和纯度的目的蛋白.研究结果表明,含FMDV 3D蛋白前115位氨基酸的重组蛋白在大肠杆菌中得到了高效可溶性表达,并具有较好的抗原活性,为开发口蹄疫诊断试剂和基因工程疫苗奠定了基础.
為穫得具有抗原性的口蹄疫病毒(FMDV) 3D蛋白N耑T細胞錶位的重組錶達蛋白,根據FMDV3D蛋白前115位氨基痠序列,設計優化併人工閤成相應的覈痠序列,將其剋隆至pET- 28a中,構建原覈錶達質粒pET28a - 115,併將重組質粒轉化至BL21 (DE3)細胞.經IPTG誘導後,收集菌液進行SDS-PAGE和Western - bolt鑒定,結果顯示,在16 kD處有一條明顯的蛋白錶達條帶.對錶達產物進行可溶性分析,結果錶達蛋白50％為可溶性蛋白,經Ni- NTA親和層析純化後穫得瞭較高濃度和純度的目的蛋白.研究結果錶明,含FMDV 3D蛋白前115位氨基痠的重組蛋白在大腸桿菌中得到瞭高效可溶性錶達,併具有較好的抗原活性,為開髮口蹄疫診斷試劑和基因工程疫苗奠定瞭基礎.
위획득구유항원성적구제역병독(FMDV) 3D단백N단T세포표위적중조표체단백,근거FMDV3D단백전115위안기산서렬,설계우화병인공합성상응적핵산서렬,장기극륭지pET- 28a중,구건원핵표체질립pET28a - 115,병장중조질립전화지BL21 (DE3)세포.경IPTG유도후,수집균액진행SDS-PAGE화Western - bolt감정,결과현시,재16 kD처유일조명현적단백표체조대.대표체산물진행가용성분석,결과표체단백50％위가용성단백,경Ni- NTA친화층석순화후획득료교고농도화순도적목적단백.연구결과표명,함FMDV 3D단백전115위안기산적중조단백재대장간균중득도료고효가용성표체,병구유교호적항원활성,위개발구제역진단시제화기인공정역묘전정료기출.
