成都医学院学报
成都醫學院學報
성도의학원학보
JOURNAL OF CHENGDU MEDICAL COLLEGE
2013年
1期
45-48
,共4页
宋瑱%王凤草%米娇%李燕
宋瑱%王鳳草%米嬌%李燕
송진%왕봉초%미교%리연
表皮葡萄球菌%luxS基因%生物膜
錶皮葡萄毬菌%luxS基因%生物膜
표피포도구균%luxS기인%생물막
目的 构建1个含有luxS基因上、下游片段、抗卡那霉素基因的重组克隆质粒,用以敲除表皮葡萄球菌luxS基因.方法 检索GenBank获得luxS基因序列以设计引物,以生物膜阳性表皮葡萄球菌基因组DNA为模板,采用高保真PCR扩增得到包含luxS基因上游片段、完整的luxS基因和luxS基因下游片段的长片段DN A;以pEASY-T4质粒为模板扩增得到抗卡那霉素基因,再用内侧引物分别扩增luxS基因上、下游序列,按luxS基因上游片段+抗卡那霉素基因+luxS基因下游片段的顺序重组连接,转化JM109感受态细胞,通过卡那霉素筛选、酶切分析和PCR-测序验证luxS基因敲除的重组克隆载体.结果 经酶切后电泳验证重组质粒中各目的片段插入无误,PCR检测结果证明重组质粒luxS基因缺失,测序结果显示碱基无错配,含目的基因的重组质粒菌株在含卡那霉素培养平板内正常生长,证明插入的抗卡那霉素基因表达良好.结论 表皮葡萄球菌luxS基因敲除重组质粒构建成功,为后续luxS基因缺陷株的构建奠定了基础.
目的 構建1箇含有luxS基因上、下遊片段、抗卡那黴素基因的重組剋隆質粒,用以敲除錶皮葡萄毬菌luxS基因.方法 檢索GenBank穫得luxS基因序列以設計引物,以生物膜暘性錶皮葡萄毬菌基因組DNA為模闆,採用高保真PCR擴增得到包含luxS基因上遊片段、完整的luxS基因和luxS基因下遊片段的長片段DN A;以pEASY-T4質粒為模闆擴增得到抗卡那黴素基因,再用內側引物分彆擴增luxS基因上、下遊序列,按luxS基因上遊片段+抗卡那黴素基因+luxS基因下遊片段的順序重組連接,轉化JM109感受態細胞,通過卡那黴素篩選、酶切分析和PCR-測序驗證luxS基因敲除的重組剋隆載體.結果 經酶切後電泳驗證重組質粒中各目的片段插入無誤,PCR檢測結果證明重組質粒luxS基因缺失,測序結果顯示堿基無錯配,含目的基因的重組質粒菌株在含卡那黴素培養平闆內正常生長,證明插入的抗卡那黴素基因錶達良好.結論 錶皮葡萄毬菌luxS基因敲除重組質粒構建成功,為後續luxS基因缺陷株的構建奠定瞭基礎.
목적 구건1개함유luxS기인상、하유편단、항잡나매소기인적중조극륭질립,용이고제표피포도구균luxS기인.방법 검색GenBank획득luxS기인서렬이설계인물,이생물막양성표피포도구균기인조DNA위모판,채용고보진PCR확증득도포함luxS기인상유편단、완정적luxS기인화luxS기인하유편단적장편단DN A;이pEASY-T4질립위모판확증득도항잡나매소기인,재용내측인물분별확증luxS기인상、하유서렬,안luxS기인상유편단+항잡나매소기인+luxS기인하유편단적순서중조련접,전화JM109감수태세포,통과잡나매소사선、매절분석화PCR-측서험증luxS기인고제적중조극륭재체.결과 경매절후전영험증중조질립중각목적편단삽입무오,PCR검측결과증명중조질립luxS기인결실,측서결과현시감기무착배,함목적기인적중조질립균주재함잡나매소배양평판내정상생장,증명삽입적항잡나매소기인표체량호.결론 표피포도구균luxS기인고제중조질립구건성공,위후속luxS기인결함주적구건전정료기출.
