热带作物学报
熱帶作物學報
열대작물학보
CHINESE JOURNAL OF TROPICAL CROPS
2014年
1期
59-67
,共9页
张玉叶%黄宁%苏炜华%肖新换%罗俊%阙友雄
張玉葉%黃寧%囌煒華%肖新換%囉俊%闕友雄
장옥협%황저%소위화%초신환%라준%궐우웅
甘蔗%苏氨酸脱氨酶基因%电子克隆%生物信息学%表达分析
甘蔗%囌氨痠脫氨酶基因%電子剋隆%生物信息學%錶達分析
감자%소안산탈안매기인%전자극륭%생물신식학%표체분석
Sugarcane%Threonine deaminase gene%In silico cloning%Bioinformatics%Expression analysis
应用电子克隆技术,以烟草AAG59585序列为探针,获得了甘蔗苏氨酸脱氨酶(threonine deaminase)基因的全长cDNA,命名为Sc TD.经RT-PCR扩增和验证,该基因序列与电子克隆结果一致性高达99％.序列分析结果表明:Sc TD基因全长2 120 bp,具有完整的开放阅读框(ORF,164～1 681 bp),编码505个氨基酸,该基因编码蛋白定位于微体,为可溶性蛋白,不存在信号肽,二级结构原件多为α-螺旋,含有多个保守功能域,主要在氨基酸合成中发挥作用.电子表达分析结果显示,该基因在甘蔗根尖、根颈、花序、叶片、全株、芽和茎中组成型表达,其中在花序和根中的表达量最高.荧光定量PCR结果分析表明:该基因在甘蔗各组织中均有表达,且在根中的表达量最高.此外,该基因的表达受水杨酸胁迫后表达量最高,约为对照组的43.16倍,其次为聚乙二醇和茉莉酸甲酯,分别为6.90倍和4.40倍,推测该基因的表达与甘蔗抗病虫和抗渗透胁迫有关.此结果为甘蔗ScTD基因的克隆和功能验证以及在甘蔗基因工程中的应用奠定基础.
應用電子剋隆技術,以煙草AAG59585序列為探針,穫得瞭甘蔗囌氨痠脫氨酶(threonine deaminase)基因的全長cDNA,命名為Sc TD.經RT-PCR擴增和驗證,該基因序列與電子剋隆結果一緻性高達99％.序列分析結果錶明:Sc TD基因全長2 120 bp,具有完整的開放閱讀框(ORF,164～1 681 bp),編碼505箇氨基痠,該基因編碼蛋白定位于微體,為可溶性蛋白,不存在信號肽,二級結構原件多為α-螺鏇,含有多箇保守功能域,主要在氨基痠閤成中髮揮作用.電子錶達分析結果顯示,該基因在甘蔗根尖、根頸、花序、葉片、全株、芽和莖中組成型錶達,其中在花序和根中的錶達量最高.熒光定量PCR結果分析錶明:該基因在甘蔗各組織中均有錶達,且在根中的錶達量最高.此外,該基因的錶達受水楊痠脅迫後錶達量最高,約為對照組的43.16倍,其次為聚乙二醇和茉莉痠甲酯,分彆為6.90倍和4.40倍,推測該基因的錶達與甘蔗抗病蟲和抗滲透脅迫有關.此結果為甘蔗ScTD基因的剋隆和功能驗證以及在甘蔗基因工程中的應用奠定基礎.
응용전자극륭기술,이연초AAG59585서렬위탐침,획득료감자소안산탈안매(threonine deaminase)기인적전장cDNA,명명위Sc TD.경RT-PCR확증화험증,해기인서렬여전자극륭결과일치성고체99％.서렬분석결과표명:Sc TD기인전장2 120 bp,구유완정적개방열독광(ORF,164～1 681 bp),편마505개안기산,해기인편마단백정위우미체,위가용성단백,불존재신호태,이급결구원건다위α-라선,함유다개보수공능역,주요재안기산합성중발휘작용.전자표체분석결과현시,해기인재감자근첨、근경、화서、협편、전주、아화경중조성형표체,기중재화서화근중적표체량최고.형광정량PCR결과분석표명:해기인재감자각조직중균유표체,차재근중적표체량최고.차외,해기인적표체수수양산협박후표체량최고,약위대조조적43.16배,기차위취을이순화말리산갑지,분별위6.90배화4.40배,추측해기인적표체여감자항병충화항삼투협박유관.차결과위감자ScTD기인적극륭화공능험증이급재감자기인공정중적응용전정기출.
