CAJ | 학술논문

目的构建人MIIP蛋白与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达及生物学活性鉴定.方法 RT-PCR扩增得到人MIIP基因全长编码序列,采用重组DNA技术将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建获得重组原核表达载体pGEX-4T-1-MIIP,经酶切鉴定及测序验证完全正确后,将其转化至大肠杆菌BL21细胞中,用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经纯化获得目的蛋白,用Western blot鉴定所得融合蛋白.结果构建了pGEX-4T-1-MIIP原核表达载体,在大肠杆菌中表达获得了GST-MIIP融合蛋白,经Glutathione Agarose纯化和Western blot检测,证实所得GST-MIIP融合蛋白具有生物学活性.结论成功获得了有生物学活性的GST-MIIP融合蛋白.
목적 구건인MIIP단백여곡광감태전이매(GST)중조적융합단백원핵표체재체병진행표체급생물학활성감정.방법 RT-PCR확증득도인MIIP기인전장편마서렬,채용중조DNA기술장기극륭지원핵표체재체pGEX-4T-1,구건획득중조원핵표체재체pGEX-4T-1-MIIP,경매절감정급측서험증완전정학후,장기전화지대장간균BL21세포중,용이병기류대-β-D반유당감(IPTG)유도표체,경순화획득목적 단백,용Western blot감정소득융합단백.결과 구건료pGEX-4T-1-MIIP원핵표체재체,재대장간균중표체획득료GST-MIIP융합단백,경Glutathione Agarose순화화Western blot검측,증실소득GST-MIIP융합단백구유생물학활성.결론 성공획득료유생물학활성적GST-MIIP융합단백.