中国真菌学杂志
中國真菌學雜誌
중국진균학잡지
CHINESE JOURNAL OF MYCOLOGY
2013年
6期
321-324
,共4页
王芳%穆超%赵静雅%高莉%胡小华%韩黎%田曙光
王芳%穆超%趙靜雅%高莉%鬍小華%韓黎%田曙光
왕방%목초%조정아%고리%호소화%한려%전서광
皮炎外瓶霉%核糖体基因%荧光定量聚合酶链反应
皮炎外瓶黴%覈糖體基因%熒光定量聚閤酶鏈反應
피염외병매%핵당체기인%형광정량취합매련반응
Exophiala dermatitis%ribosomal genes%fluorescence quantitative polymerase chain reaction
目的 建立基于TaqMan探针技术的皮炎外瓶霉荧光定量PCR检测方法.方法 通过对皮炎外瓶霉ITS区域基因组序列(GenBank:JN675373.1)进行分析,设计合成特异性引物和荧光标记探针,优化荧光定量PCR反应条件.以临床标本中分离的皮炎外瓶霉为阳性菌株,及其他种类真菌和细菌作为阴性对照菌株,从特异性、敏感性及重复性方面对该方法检测效果进行评价.结果 该研究设计的引物和探针能扩增皮炎外瓶霉特异性序列.临床分离得到的皮炎外瓶霉在反应中有明显扩增曲线,而甄氏外瓶霉、棘状外瓶霉、烟曲霉、白色念珠菌、新生隐球菌、马内菲青霉等20株菌在CT值≤38范围内均未有扩增;利用基因重组构建的标准品完成了标准曲线的绘制,在1.0×103～1.0×107拷贝数(Cp)内具有良好的线性关系(R2=1.000),最低可检出量为10 Cp/μL.结论 成功建立了荧光定量PCR检测皮炎外瓶霉方法,该法特异度强、敏感度高、重复性好,将有助于临床皮炎外瓶霉感染的早期诊断和针对性治疗.
目的 建立基于TaqMan探針技術的皮炎外瓶黴熒光定量PCR檢測方法.方法 通過對皮炎外瓶黴ITS區域基因組序列(GenBank:JN675373.1)進行分析,設計閤成特異性引物和熒光標記探針,優化熒光定量PCR反應條件.以臨床標本中分離的皮炎外瓶黴為暘性菌株,及其他種類真菌和細菌作為陰性對照菌株,從特異性、敏感性及重複性方麵對該方法檢測效果進行評價.結果 該研究設計的引物和探針能擴增皮炎外瓶黴特異性序列.臨床分離得到的皮炎外瓶黴在反應中有明顯擴增麯線,而甄氏外瓶黴、棘狀外瓶黴、煙麯黴、白色唸珠菌、新生隱毬菌、馬內菲青黴等20株菌在CT值≤38範圍內均未有擴增;利用基因重組構建的標準品完成瞭標準麯線的繪製,在1.0×103～1.0×107拷貝數(Cp)內具有良好的線性關繫(R2=1.000),最低可檢齣量為10 Cp/μL.結論 成功建立瞭熒光定量PCR檢測皮炎外瓶黴方法,該法特異度彊、敏感度高、重複性好,將有助于臨床皮炎外瓶黴感染的早期診斷和針對性治療.
목적 건립기우TaqMan탐침기술적피염외병매형광정량PCR검측방법.방법 통과대피염외병매ITS구역기인조서렬(GenBank:JN675373.1)진행분석,설계합성특이성인물화형광표기탐침,우화형광정량PCR반응조건.이림상표본중분리적피염외병매위양성균주,급기타충류진균화세균작위음성대조균주,종특이성、민감성급중복성방면대해방법검측효과진행평개.결과 해연구설계적인물화탐침능확증피염외병매특이성서렬.림상분리득도적피염외병매재반응중유명현확증곡선,이견씨외병매、극상외병매、연곡매、백색념주균、신생은구균、마내비청매등20주균재CT치≤38범위내균미유확증;이용기인중조구건적표준품완성료표준곡선적회제,재1.0×103～1.0×107고패수(Cp)내구유량호적선성관계(R2=1.000),최저가검출량위10 Cp/μL.결론 성공건립료형광정량PCR검측피염외병매방법,해법특이도강、민감도고、중복성호,장유조우림상피염외병매감염적조기진단화침대성치료.
