CAJ | 학술논문

目的:利用不加任何诱导剂的悬浮培养法,体外诱导人胚胎干细胞分化为心肌细胞并检测其分化效率.方法:人胚胎干细胞克隆用200U/mL胶原酶Ⅳ,37℃处理10min后,挑起克隆碎片转移到低黏附性培养皿中悬浮培养以形成EB(拟胚体),4d后将EB转移到基质胶处理过的6孔板中贴壁培养(1-3EBs/cm2),显微镜下观察记录出现跳动心肌细胞的时间和跳动频率,并计算跳动克隆百分比,24孔板一组,共记录4组96孔;免疫荧光染色检测心肌细胞特异标志物cTnT;膜片钳实验检测心肌细胞自发性动作电位;跳动心肌细胞经过24h缺氧刺激后,用凋亡试剂盒检测心肌细胞凋亡比例.结果:在悬浮培养14d左右开始出现大量的自发跳动心肌细胞,分化出现自发跳动心肌细胞的平均时间(13.9±0.9)d,百分比为20.8％,平均跳动频率为(63.8±5.6)次/min;跳动心肌细胞cTnT染色阳性;跳动心肌细胞检测到自发性动作电位;跳动心肌细胞缺氧24h的凋亡比例为(8.1±0.4)％.结论:不加诱导剂的悬浮培养可以诱导人胚胎干细胞分化为心肌细胞,分化效率达到20.8％,分化时间14d左右.为进一步的干细胞移植治疗动物心肌梗死模型提供种子细胞.
목적:이용불가임하유도제적현부배양법,체외유도인배태간세포분화위심기세포병검측기분화효솔.방법:인배태간세포극륭용200U/mL효원매Ⅳ,37℃처리10min후,도기극륭쇄편전이도저점부성배양명중현부배양이형성EB(의배체),4d후장EB전이도기질효처리과적6공판중첩벽배양(1-3EBs/cm2),현미경하관찰기록출현도동심기세포적시간화도동빈솔,병계산도동극륭백분비,24공판일조,공기록4조96공;면역형광염색검측심기세포특이표지물cTnT;막편겸실험검측심기세포자발성동작전위;도동심기세포경과24h결양자격후,용조망시제합검측심기세포조망비례.결과:재현부배양14d좌우개시출현대량적자발도동심기세포,분화출현자발도동심기세포적평균시간(13.9±0.9)d,백분비위20.8％,평균도동빈솔위(63.8±5.6)차/min;도동심기세포cTnT염색양성;도동심기세포검측도자발성동작전위;도동심기세포결양24h적조망비례위(8.1±0.4)％.결론:불가유도제적현부배양가이유도인배태간세포분화위심기세포,분화효솔체도20.8％,분화시간14d좌우.위진일보적간세포이식치료동물심기경사모형제공충자세포.