微生物学杂志
微生物學雜誌
미생물학잡지
JOURNAL OF MICROBIOLOGY
2014年
3期
36-41
,共6页
宁文艳%吴先敏%王春梅%陈伟东%施定基
寧文豔%吳先敏%王春梅%陳偉東%施定基
저문염%오선민%왕춘매%진위동%시정기
鱼腥藻7120%人粒细胞集落刺激因子%Ptac%PsbA%表达
魚腥藻7120%人粒細胞集落刺激因子%Ptac%PsbA%錶達
어성조7120%인립세포집락자격인자%Ptac%PsbA%표체
Anabaena sp.7120%human granulocyte colony stimulating factor (hG-CSF)%Ptac%PsbA%expression
为了比较外源性启动子Ptac与内源性启动子PsbA在鱼腥藻7120中表达外源基因时的效率,构建了分别含Ptac和PsbA两种启动子的穿梭表达载体pRL-PsbA-GCSF、pRL-Tac-GCSF;利用三亲结合转移法转化鱼腥藻7120,利用抗生素筛选,通过质粒提取和PCR方法鉴定,获得了分别由2种启动子驱动表达hG-CSF的转基因蓝藻,转基因藻中目的基因以质粒形式存在;利用半定量RT-PCR方法对2种转基因藻的hG-CSF转录水平进行比较,发现PsbA启动子驱动效率与Ptac启动子没有明显差异;利用ELISA方法比较hG-CSF蛋白表达量,发现PsbA启动的蓝藻中hG-CSF表达量是Ptac诱导条件下表达量的1.17倍.
為瞭比較外源性啟動子Ptac與內源性啟動子PsbA在魚腥藻7120中錶達外源基因時的效率,構建瞭分彆含Ptac和PsbA兩種啟動子的穿梭錶達載體pRL-PsbA-GCSF、pRL-Tac-GCSF;利用三親結閤轉移法轉化魚腥藻7120,利用抗生素篩選,通過質粒提取和PCR方法鑒定,穫得瞭分彆由2種啟動子驅動錶達hG-CSF的轉基因藍藻,轉基因藻中目的基因以質粒形式存在;利用半定量RT-PCR方法對2種轉基因藻的hG-CSF轉錄水平進行比較,髮現PsbA啟動子驅動效率與Ptac啟動子沒有明顯差異;利用ELISA方法比較hG-CSF蛋白錶達量,髮現PsbA啟動的藍藻中hG-CSF錶達量是Ptac誘導條件下錶達量的1.17倍.
위료비교외원성계동자Ptac여내원성계동자PsbA재어성조7120중표체외원기인시적효솔,구건료분별함Ptac화PsbA량충계동자적천사표체재체pRL-PsbA-GCSF、pRL-Tac-GCSF;이용삼친결합전이법전화어성조7120,이용항생소사선,통과질립제취화PCR방법감정,획득료분별유2충계동자구동표체hG-CSF적전기인람조,전기인조중목적기인이질립형식존재;이용반정량RT-PCR방법대2충전기인조적hG-CSF전록수평진행비교,발현PsbA계동자구동효솔여Ptac계동자몰유명현차이;이용ELISA방법비교hG-CSF단백표체량,발현PsbA계동적람조중hG-CSF표체량시Ptac유도조건하표체량적1.17배.
