中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2014年
2期
226-229
,共4页
叶迎春%年四季%刘佳佳%王栩%高燕%袁青
葉迎春%年四季%劉佳佳%王栩%高燕%袁青
협영춘%년사계%류가가%왕허%고연%원청
scFv-Fc%CHO细胞%真核表达%IL-33
scFv-Fc%CHO細胞%真覈錶達%IL-33
scFv-Fc%CHO세포%진핵표체%IL-33
scFv-Fc%CHO cell%Eukaryotic expression%IL-33
目的:构建全人源抗IL-33 scFv-Fc重组载体,转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO),表达并鉴定融合抗体蛋白.方法:RT-PCR扩增人IgG1 Fc段并捅入真核表达载体pcDNA3.1中,构建pcDNA3.1/Fc重组载体;将合成的信号肽(SP)序列插入重组质粒pcDNA3.1/Fc,构建重组pcDNA3.1/SP-Fc通用载体;最后将本实验室前期筛选的抗IL-33 scFv插入重组质粒pcDNA3.1/SP-Fc中,构建重组pcDNA3.1/SP-scFv-Fc载体,测序正确后转染CHO细胞.RT-PCR 、Westem blot检测目的基因的转录及表达.结果:重组质粒测序结果表明成功地构建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重组真核表达载体,插入的SP-scFv-Fc目的基因大小为1 560 bp左右.转染CHO细胞后,RT-PCR结果显示目的基因在CHO细胞中成功转录,Western blot显示表达的蛋白可以和羊抗人IgG1 Fc抗血清发生特异性免疫反应.结论:成功构建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重组真核表达载体,以便于后续在CHO细胞中表达.
目的:構建全人源抗IL-33 scFv-Fc重組載體,轉染中國倉鼠卵巢細胞(Chinese hamster ovary cells,CHO),錶達併鑒定融閤抗體蛋白.方法:RT-PCR擴增人IgG1 Fc段併捅入真覈錶達載體pcDNA3.1中,構建pcDNA3.1/Fc重組載體;將閤成的信號肽(SP)序列插入重組質粒pcDNA3.1/Fc,構建重組pcDNA3.1/SP-Fc通用載體;最後將本實驗室前期篩選的抗IL-33 scFv插入重組質粒pcDNA3.1/SP-Fc中,構建重組pcDNA3.1/SP-scFv-Fc載體,測序正確後轉染CHO細胞.RT-PCR 、Westem blot檢測目的基因的轉錄及錶達.結果:重組質粒測序結果錶明成功地構建瞭pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重組真覈錶達載體,插入的SP-scFv-Fc目的基因大小為1 560 bp左右.轉染CHO細胞後,RT-PCR結果顯示目的基因在CHO細胞中成功轉錄,Western blot顯示錶達的蛋白可以和羊抗人IgG1 Fc抗血清髮生特異性免疫反應.結論:成功構建瞭pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重組真覈錶達載體,以便于後續在CHO細胞中錶達.
목적:구건전인원항IL-33 scFv-Fc중조재체,전염중국창서란소세포(Chinese hamster ovary cells,CHO),표체병감정융합항체단백.방법:RT-PCR확증인IgG1 Fc단병통입진핵표체재체pcDNA3.1중,구건pcDNA3.1/Fc중조재체;장합성적신호태(SP)서렬삽입중조질립pcDNA3.1/Fc,구건중조pcDNA3.1/SP-Fc통용재체;최후장본실험실전기사선적항IL-33 scFv삽입중조질립pcDNA3.1/SP-Fc중,구건중조pcDNA3.1/SP-scFv-Fc재체,측서정학후전염CHO세포.RT-PCR 、Westem blot검측목적기인적전록급표체.결과:중조질립측서결과표명성공지구건료pcDNA3.1/SP-scFv-Fc중조진핵표체재체,삽입적SP-scFv-Fc목적기인대소위1 560 bp좌우.전염CHO세포후,RT-PCR결과현시목적기인재CHO세포중성공전록,Western blot현시표체적단백가이화양항인IgG1 Fc항혈청발생특이성면역반응.결론:성공구건료pcDNA3.1/SP-scFv-Fc중조진핵표체재체,이편우후속재CHO세포중표체.
