中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2014年
2期
216-221
,共6页
乔海霞%张彦霞%戴明艳%张存辉%常月立%贾晓辉%张玉妥
喬海霞%張彥霞%戴明豔%張存輝%常月立%賈曉輝%張玉妥
교해하%장언하%대명염%장존휘%상월립%가효휘%장옥타
不可分型流感嗜血杆菌%外膜蛋白P6%原核表达%黏膜免疫效应
不可分型流感嗜血桿菌%外膜蛋白P6%原覈錶達%黏膜免疫效應
불가분형류감기혈간균%외막단백P6%원핵표체%점막면역효응
Nontypeable Haemophilus influenzae (NTHi)%Outer membrane protein P6 (P6)%Prokaryotic expression%Mucosal immune effector
目的:研究不可分型流感嗜血杆菌重组P6蛋白的免疫原性,以确定重组P6蛋白在不可分型流感嗜血杆菌疫苗研制中的应用价值.方法:扩增P6目的基因,构建重组质粒PGEX-6P2/P6,鉴定后将其转化入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导、纯化后经SDS-PAGE、Western blot分析;纯化的重组蛋白经滴鼻方式免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测血清IgG,肺灌洗液IgA的水平及脾细胞中IL-4、IL-10、IL-17和IFN-γ的产生水平.CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖情况.结果:成功构建了重组表达载体PGEX-6P2/P6,并表达GST-P6融合蛋白.Western blot证明GST-P6蛋白能与菌源P6蛋白免疫小鼠后的抗血清发生特异性反应.动物实验表明重组P6蛋白通过滴鼻途径既能刺激小鼠产生血清IgG,又能诱导肺黏膜产生较高的特异性IgA抗体.重组蛋白+ IL-2组小鼠脾淋巴细胞所产生的IL-17和IFN-γ的含量高于对照组(P＜0.05).结论:P6蛋白的原核表达载体PGEX-6P2/P6在大肠杆菌XL1-Blue中大量表达,重组P6蛋白经黏膜免疫可以同时诱导产生体液免疫和细胞免疫.此实验为P6蛋白疫苗的研发提供了理论基础.
目的:研究不可分型流感嗜血桿菌重組P6蛋白的免疫原性,以確定重組P6蛋白在不可分型流感嗜血桿菌疫苗研製中的應用價值.方法:擴增P6目的基因,構建重組質粒PGEX-6P2/P6,鑒定後將其轉化入E.coli XL1-Blue,IPTG誘導、純化後經SDS-PAGE、Western blot分析;純化的重組蛋白經滴鼻方式免疫BALB/c小鼠,ELISA法檢測血清IgG,肺灌洗液IgA的水平及脾細胞中IL-4、IL-10、IL-17和IFN-γ的產生水平.CCK-8法檢測脾淋巴細胞增殖情況.結果:成功構建瞭重組錶達載體PGEX-6P2/P6,併錶達GST-P6融閤蛋白.Western blot證明GST-P6蛋白能與菌源P6蛋白免疫小鼠後的抗血清髮生特異性反應.動物實驗錶明重組P6蛋白通過滴鼻途徑既能刺激小鼠產生血清IgG,又能誘導肺黏膜產生較高的特異性IgA抗體.重組蛋白+ IL-2組小鼠脾淋巴細胞所產生的IL-17和IFN-γ的含量高于對照組(P＜0.05).結論:P6蛋白的原覈錶達載體PGEX-6P2/P6在大腸桿菌XL1-Blue中大量錶達,重組P6蛋白經黏膜免疫可以同時誘導產生體液免疫和細胞免疫.此實驗為P6蛋白疫苗的研髮提供瞭理論基礎.
목적:연구불가분형류감기혈간균중조P6단백적면역원성,이학정중조P6단백재불가분형류감기혈간균역묘연제중적응용개치.방법:확증P6목적기인,구건중조질립PGEX-6P2/P6,감정후장기전화입E.coli XL1-Blue,IPTG유도、순화후경SDS-PAGE、Western blot분석;순화적중조단백경적비방식면역BALB/c소서,ELISA법검측혈청IgG,폐관세액IgA적수평급비세포중IL-4、IL-10、IL-17화IFN-γ적산생수평.CCK-8법검측비림파세포증식정황.결과:성공구건료중조표체재체PGEX-6P2/P6,병표체GST-P6융합단백.Western blot증명GST-P6단백능여균원P6단백면역소서후적항혈청발생특이성반응.동물실험표명중조P6단백통과적비도경기능자격소서산생혈청IgG,우능유도폐점막산생교고적특이성IgA항체.중조단백+ IL-2조소서비림파세포소산생적IL-17화IFN-γ적함량고우대조조(P＜0.05).결론:P6단백적원핵표체재체PGEX-6P2/P6재대장간균XL1-Blue중대량표체,중조P6단백경점막면역가이동시유도산생체액면역화세포면역.차실험위P6단백역묘적연발제공료이론기출.
