广西科学
廣西科學
엄서과학
GUANGXI SCIENCES
2013年
2期
148-151,157
,共5页
张水龙%陈东%曹树威%昊仁智%黄日波
張水龍%陳東%曹樹威%昊仁智%黃日波
장수룡%진동%조수위%호인지%황일파
木聚糖酶%黑曲霉%酿酒酵母
木聚糖酶%黑麯黴%釀酒酵母
목취당매%흑곡매%양주효모
从黑曲霉(Aspergillus niger)克隆木聚糖酶基因xynB,利用重叠延伸PCR法去除其中的内含子.将该基因与质粒pYES2连接,构建真核表达载体,用醋酸锂化转法导人酿酒酵母(Sacharom yces cerevisiae)INVSC1菌株表达.利用α信号肽替换基因原信号肽,以考察信号肽对表达蛋白分泌的影响.结果获得2株重组菌株,分别为xynB连接原信号肽的pYES2-xynB菌株和xynB连接α信号肽的pYES2-xynB-α菌株.木聚糖酶B成功表达,SDS-PAGE检测到约24kDa目的蛋白质条带.木聚糖酶B最适催化温度为50℃,最适催化pH值为5.0,Mn2+对酶活具有强烈的抑制作用.将α信号肽取代原信号肽使酶活达到最高的诱导时间由72h缩短为48h,但是置换信号肽使最高酶活由7.59U降低为3.97U.
從黑麯黴(Aspergillus niger)剋隆木聚糖酶基因xynB,利用重疊延伸PCR法去除其中的內含子.將該基因與質粒pYES2連接,構建真覈錶達載體,用醋痠鋰化轉法導人釀酒酵母(Sacharom yces cerevisiae)INVSC1菌株錶達.利用α信號肽替換基因原信號肽,以攷察信號肽對錶達蛋白分泌的影響.結果穫得2株重組菌株,分彆為xynB連接原信號肽的pYES2-xynB菌株和xynB連接α信號肽的pYES2-xynB-α菌株.木聚糖酶B成功錶達,SDS-PAGE檢測到約24kDa目的蛋白質條帶.木聚糖酶B最適催化溫度為50℃,最適催化pH值為5.0,Mn2+對酶活具有彊烈的抑製作用.將α信號肽取代原信號肽使酶活達到最高的誘導時間由72h縮短為48h,但是置換信號肽使最高酶活由7.59U降低為3.97U.
종흑곡매(Aspergillus niger)극륭목취당매기인xynB,이용중첩연신PCR법거제기중적내함자.장해기인여질립pYES2련접,구건진핵표체재체,용작산리화전법도인양주효모(Sacharom yces cerevisiae)INVSC1균주표체.이용α신호태체환기인원신호태,이고찰신호태대표체단백분비적영향.결과획득2주중조균주,분별위xynB련접원신호태적pYES2-xynB균주화xynB련접α신호태적pYES2-xynB-α균주.목취당매B성공표체,SDS-PAGE검측도약24kDa목적단백질조대.목취당매B최괄최화온도위50℃,최괄최화pH치위5.0,Mn2+대매활구유강렬적억제작용.장α신호태취대원신호태사매활체도최고적유도시간유72h축단위48h,단시치환신호태사최고매활유7.59U강저위3.97U.
