CAJ | 학술논문

目的对新近建立的乙肝研究动物模型喜马拉雅旱獭3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的部分cDNA序列进行了克隆和序列分析,为该模型在HBV感染研究中的应用奠定基础.方法根据Genbank的人GAPDH cDNA的序列设计特异性引物,以提取的旱獭脾组织总RNA为模板,RT-PCR扩增旱獭GAPDHcDNA序列.纯化的PCR产物连接至T载体(pMD 18-T),然后构建重组质粒pMD18-T-mhGAPDH.对重组质粒进行PCR初筛、酶切鉴定,将阳性克隆测序.对序列进行同源性以及种系进化分析.结果扩增的旱獭GAPDH序列为535 bp,编码序列为533 bp (nt3-535),编码177个氨基酸.获得的序列和其它类哺乳动物GAPDH的同源性均在88％以上,其中与土拨鼠GAPDH的同源性最高(99.62％),氨基酸序列同源性高达100％.构建种系进化树,分析结果提示喜马拉雅旱獭GAPDH与土拨鼠GAPDH的亲缘关系最接近.结论成功的克隆了喜马拉雅旱獭GAPDH的部分序列.序列分析结果提示喜马拉雅旱獭GAPDH与土拨鼠GAPDH的亲缘关系最近,同源性最高.
목적 대신근건립적을간연구동물모형희마랍아한달3-린산감유철탈경매(GAPDH)적부분cDNA서렬진행료극륭화서렬분석,위해모형재HBV감염연구중적응용전정기출.방법 근거Genbank적인GAPDH cDNA적서렬설계특이성인물,이제취적한달비조직총RNA위모판,RT-PCR확증한달GAPDHcDNA서렬.순화적PCR산물련접지T재체(pMD 18-T),연후구건중조질립pMD18-T-mhGAPDH.대중조질립진행PCR초사、매절감정,장양성극륭측서.대서렬진행동원성이급충계진화분석.결과 확증적한달GAPDH서렬위535 bp,편마서렬위533 bp (nt3-535),편마177개안기산.획득적서렬화기타류포유동물GAPDH적동원성균재88％이상,기중여토발서GAPDH적동원성최고(99.62％),안기산서렬동원성고체100％.구건충계진화수,분석결과제시희마랍아한달GAPDH여토발서GAPDH적친연관계최접근.결론 성공적극륭료희마랍아한달GAPDH적부분서렬.서렬분석결과제시희마랍아한달GAPDH여토발서GAPDH적친연관계최근,동원성최고.