医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2013年
12期
1236-1240
,共5页
HERG钾通道%Caveolin-1%RNA干扰%脂筏%膜片钳技术
HERG鉀通道%Caveolin-1%RNA榦擾%脂筏%膜片鉗技術
HERG갑통도%Caveolin-1%RNA간우%지벌%막편겸기술
目的 既往研究发现caveolin-1参与了多种心脏离子通道的调控作用,但对心脏HERG钾通道是否具有调控作用,则未见报道.研究caveolin-1对心脏HERG钾通道功能的调控作用.方法 ①基因转染:应用Lipofectamine 2000将pcDNA3.0-caveolin-1质粒和pcDNA3.0-herg转染HEK293细胞,通过G418筛选获得稳定表达细胞株;②脂筏破坏:通过在培养液中加入10mmol/L的甲基-β-环糊精,去除HEK293/HERG细胞膜上的脂筏;③Caveolin-1表达抑制:应用siRNA转染HEK293/HERG细胞抑制caveolin-1表达;④Caveolin-1过度表达:将pcDNA3.0-herg转染HEK293/caveolin-1细胞株,获得caveolin-1过度表达的HEK293/HERG细胞;⑤应用膜片钳技术记录经不同处理后的HERG通道电流.结果 ①细胞膜脂筏破坏与caveolin-1表达抑制均能显著增大HERG钾通道电流幅度和显著加速尾电流去激活速率;②Caveolin-1过度表达则显著减小了HERG通道电流的振幅并显著缓慢了尾电流的去激活速率.结论 Caveolin-1对心脏HERG钾通道的功能具有负性调控作用.
目的 既往研究髮現caveolin-1參與瞭多種心髒離子通道的調控作用,但對心髒HERG鉀通道是否具有調控作用,則未見報道.研究caveolin-1對心髒HERG鉀通道功能的調控作用.方法 ①基因轉染:應用Lipofectamine 2000將pcDNA3.0-caveolin-1質粒和pcDNA3.0-herg轉染HEK293細胞,通過G418篩選穫得穩定錶達細胞株;②脂筏破壞:通過在培養液中加入10mmol/L的甲基-β-環糊精,去除HEK293/HERG細胞膜上的脂筏;③Caveolin-1錶達抑製:應用siRNA轉染HEK293/HERG細胞抑製caveolin-1錶達;④Caveolin-1過度錶達:將pcDNA3.0-herg轉染HEK293/caveolin-1細胞株,穫得caveolin-1過度錶達的HEK293/HERG細胞;⑤應用膜片鉗技術記錄經不同處理後的HERG通道電流.結果 ①細胞膜脂筏破壞與caveolin-1錶達抑製均能顯著增大HERG鉀通道電流幅度和顯著加速尾電流去激活速率;②Caveolin-1過度錶達則顯著減小瞭HERG通道電流的振幅併顯著緩慢瞭尾電流的去激活速率.結論 Caveolin-1對心髒HERG鉀通道的功能具有負性調控作用.
목적 기왕연구발현caveolin-1삼여료다충심장리자통도적조공작용,단대심장HERG갑통도시부구유조공작용,칙미견보도.연구caveolin-1대심장HERG갑통도공능적조공작용.방법 ①기인전염:응용Lipofectamine 2000장pcDNA3.0-caveolin-1질립화pcDNA3.0-herg전염HEK293세포,통과G418사선획득은정표체세포주;②지벌파배:통과재배양액중가입10mmol/L적갑기-β-배호정,거제HEK293/HERG세포막상적지벌;③Caveolin-1표체억제:응용siRNA전염HEK293/HERG세포억제caveolin-1표체;④Caveolin-1과도표체:장pcDNA3.0-herg전염HEK293/caveolin-1세포주,획득caveolin-1과도표체적HEK293/HERG세포;⑤응용막편겸기술기록경불동처리후적HERG통도전류.결과 ①세포막지벌파배여caveolin-1표체억제균능현저증대HERG갑통도전류폭도화현저가속미전류거격활속솔;②Caveolin-1과도표체칙현저감소료HERG통도전류적진폭병현저완만료미전류적거격활속솔.결론 Caveolin-1대심장HERG갑통도적공능구유부성조공작용.
