北京大学学报（医学版）
北京大學學報（醫學版）
북경대학학보（의학판）
JOURNAL OF BEIJING MEDICAL UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2013年
5期
782-786
,共5页
郑晖%林久祥%杜宁%陈峰
鄭暉%林久祥%杜寧%陳峰
정휘%림구상%두저%진봉
寡核苷酸探针%变形链球菌%实时聚合酶链反应%RNA,核糖体,16S
寡覈苷痠探針%變形鏈毬菌%實時聚閤酶鏈反應%RNA,覈糖體,16S
과핵감산탐침%변형련구균%실시취합매련반응%RNA,핵당체,16S
目的:设计一种新型TaqMan(R) MGB探针,利用实时荧光定量PCR检测变形链球菌,提高PCR法检测变形链球菌的特异性,减少检测的假阳性.方法:提取 6种不同链球属细菌的DNA,分别进行巢式PCR和TaqMan(R) MGB实时荧光定量PCR,比较两种PCR方法检测变形链球菌的特异性.巢式PCR第1轮扩增的引物是细菌16S rRNA基因通用引物,第2轮扩增使用变形链球菌16S rRNA基因可变区序列的特异性引物.TaqMan(R) MGB实时荧光定量PCR的引物与第2轮巢式PCR特异性引物相同,设计的MGB探针序列与变形链球菌16S rRNA基因中特异性序列相匹配,不与其他细菌的基因序列匹配.将变形链球菌标准株的DNA样本从2.5 mg/L至0.16 μg/L 按5倍梯度稀释,制备出实时荧光定量PCR的标准曲线.结果:变形链球菌和格氏链球菌在巢式PCR中均扩增出282 bp的DNA片段,出现假阳性结果.TaqMan(R) MGB实时荧光定量PCR能定量检出变形链球菌标准株和临床株,不检出其他链球菌,比巢式PCR特异性更好.TaqMan(R) MGB实时荧光定量PCR对变形链球菌DNA的最低检出浓度为20 μg/L.结论:本研究设计出一种针对变形链球菌的TaqMan(R) MGB探针,建立利用TaqMan(R) MGB实时荧光定量PCR特异性检测口腔中变形链球菌的方法.
目的:設計一種新型TaqMan(R) MGB探針,利用實時熒光定量PCR檢測變形鏈毬菌,提高PCR法檢測變形鏈毬菌的特異性,減少檢測的假暘性.方法:提取 6種不同鏈毬屬細菌的DNA,分彆進行巢式PCR和TaqMan(R) MGB實時熒光定量PCR,比較兩種PCR方法檢測變形鏈毬菌的特異性.巢式PCR第1輪擴增的引物是細菌16S rRNA基因通用引物,第2輪擴增使用變形鏈毬菌16S rRNA基因可變區序列的特異性引物.TaqMan(R) MGB實時熒光定量PCR的引物與第2輪巢式PCR特異性引物相同,設計的MGB探針序列與變形鏈毬菌16S rRNA基因中特異性序列相匹配,不與其他細菌的基因序列匹配.將變形鏈毬菌標準株的DNA樣本從2.5 mg/L至0.16 μg/L 按5倍梯度稀釋,製備齣實時熒光定量PCR的標準麯線.結果:變形鏈毬菌和格氏鏈毬菌在巢式PCR中均擴增齣282 bp的DNA片段,齣現假暘性結果.TaqMan(R) MGB實時熒光定量PCR能定量檢齣變形鏈毬菌標準株和臨床株,不檢齣其他鏈毬菌,比巢式PCR特異性更好.TaqMan(R) MGB實時熒光定量PCR對變形鏈毬菌DNA的最低檢齣濃度為20 μg/L.結論:本研究設計齣一種針對變形鏈毬菌的TaqMan(R) MGB探針,建立利用TaqMan(R) MGB實時熒光定量PCR特異性檢測口腔中變形鏈毬菌的方法.
목적:설계일충신형TaqMan(R) MGB탐침,이용실시형광정량PCR검측변형련구균,제고PCR법검측변형련구균적특이성,감소검측적가양성.방법:제취 6충불동련구속세균적DNA,분별진행소식PCR화TaqMan(R) MGB실시형광정량PCR,비교량충PCR방법검측변형련구균적특이성.소식PCR제1륜확증적인물시세균16S rRNA기인통용인물,제2륜확증사용변형련구균16S rRNA기인가변구서렬적특이성인물.TaqMan(R) MGB실시형광정량PCR적인물여제2륜소식PCR특이성인물상동,설계적MGB탐침서렬여변형련구균16S rRNA기인중특이성서렬상필배,불여기타세균적기인서렬필배.장변형련구균표준주적DNA양본종2.5 mg/L지0.16 μg/L 안5배제도희석,제비출실시형광정량PCR적표준곡선.결과:변형련구균화격씨련구균재소식PCR중균확증출282 bp적DNA편단,출현가양성결과.TaqMan(R) MGB실시형광정량PCR능정량검출변형련구균표준주화림상주,불검출기타련구균,비소식PCR특이성경호.TaqMan(R) MGB실시형광정량PCR대변형련구균DNA적최저검출농도위20 μg/L.결론:본연구설계출일충침대변형련구균적TaqMan(R) MGB탐침,건립이용TaqMan(R) MGB실시형광정량PCR특이성검측구강중변형련구균적방법.
