CAJ | 학술논문

目的建立流式微球分析技术联合检测人血清中基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、髓过氧化物酶(MPO)、CD40配体(CD40L)、血浆纤溶酶原激活物(t-PA)的方法并对其进行系统性评价.方法分别将四种选择好一定浓度的捕获抗体(MMP-9、MPO、CD40L和t-PA鼠抗人单克隆抗体)包被在四种已激活的不同荧光强度编码的羧基化聚苯乙烯微球上,用棋盘法对试验条件进行优化选择,并应用CLSI的有关规则进行方法学评价.结果反应体系中四种鼠抗人单克隆抗体最佳加入量为10 μg,最佳生物素标记抗体浓度为1∶4000倍稀释,最佳反应时间为2h,亲和素最适孵育时间为1h.MMP-9线性范围是0.20～333.33 ng/mL,批内变异系数为4.60％～8.80％,批间变异系数为8.80％～9.60％,准确度相对偏倚为2.80％～3.18％,回收率是94.8～102.50％,灵敏度为0.20 ng/mL;MPO线性范围是0.26～111.11ng/mL,批内变异系数为5.90％～7.70％,批间变异系数为9.10％～11.40％,准确度相对偏倚为1.44％～4.12％,回收率是97.8～103.2％,灵敏度为0.26 ng/mL;CD40L线性范围是0.32～111.11g/mL,批内变异系数为5.40％～6.50％,批间变异系数为8.90％～12.40％,准确度相对偏倚为2.72％～5.95％,回收率是97.20～105.30％,灵敏度为0.32 ng/mL;t-PA线性范围是1.21～111.11 ng/mL,批内变异系数为2.20％～2.90％,批间变异系数为6.30％～12.20％,准确度相对偏倚为1.23％～4.60％,回收率是97.20～101.30％,灵敏度为1.21 ng/mL.高浓度的甘油三酯、胆固醇和胆红素对四种因子有一定的干扰率,低浓度的甘油三酯、胆固醇和胆红素对三种因子干扰较小.分别与ELISA方法比较无显著差异.结论自建的MMP-9、MPO、CD40L和t-PA1流式微球联合检测技术,可拓展流式细胞分析技术,值得临床推广使用.
목적 건립류식미구분석기술연합검측인혈청중기질금속단백매-9 (MMP-9)、수과양화물매(MPO)、CD40배체(CD40L)、혈장섬용매원격활물(t-PA)적방법병대기진행계통성평개.방법 분별장사충선택호일정농도적포획항체(MMP-9、MPO、CD40L화t-PA서항인단극륭항체)포피재사충이격활적불동형광강도편마적최기화취분을희미구상,용기반법대시험조건진행우화선택,병응용CLSI적유관규칙진행방법학평개.결과 반응체계중사충서항인단극륭항체최가가입량위10 μg,최가생물소표기항체농도위1∶4000배희석,최가반응시간위2h,친화소최괄부육시간위1h.MMP-9선성범위시0.20～333.33 ng/mL,비내변이계수위4.60％～8.80％,비간변이계수위8.80％～9.60％,준학도상대편의위2.80％～3.18％,회수솔시94.8～102.50％,령민도위0.20 ng/mL;MPO선성범위시0.26～111.11ng/mL,비내변이계수위5.90％～7.70％,비간변이계수위9.10％～11.40％,준학도상대편의위1.44％～4.12％,회수솔시97.8～103.2％,령민도위0.26 ng/mL;CD40L선성범위시0.32～111.11g/mL,비내변이계수위5.40％～6.50％,비간변이계수위8.90％～12.40％,준학도상대편의위2.72％～5.95％,회수솔시97.20～105.30％,령민도위0.32 ng/mL;t-PA선성범위시1.21～111.11 ng/mL,비내변이계수위2.20％～2.90％,비간변이계수위6.30％～12.20％,준학도상대편의위1.23％～4.60％,회수솔시97.20～101.30％,령민도위1.21 ng/mL.고농도적감유삼지、담고순화담홍소대사충인자유일정적간우솔,저농도적감유삼지、담고순화담홍소대삼충인자간우교소.분별여ELISA방법비교무현저차이.결론 자건적MMP-9、MPO、CD40L화t-PA1류식미구연합검측기술,가탁전류식세포분석기술,치득림상추엄사용.