贵州医药
貴州醫藥
귀주의약
GUIZHOU MEDICAL JOURNAL
2012年
5期
392-394
,共3页
程小平%邓香根%沈定霞%罗燕萍
程小平%鄧香根%瀋定霞%囉燕萍
정소평%산향근%침정하%라연평
铜绿假单胞菌%MexA基因%基因克隆表达
銅綠假單胞菌%MexA基因%基因剋隆錶達
동록가단포균%MexA기인%기인극륭표체
目的 构建MexA原核表达载体,并实现MexA原核表达、纯化.方法 从多重耐药的铜绿假单胞菌抽提DNA,经PCR扩增出mexA1基因与PUC18克隆载体连接,PCR、酶切及测序鉴定,再经PCR扩增出mexA基因,酶切纯化后克隆到原核表达载体PQE30,构建重组表达载体PQE30/mexA,PCR及酶切鉴定,IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot检测有无蛋白的表达.结果 已获得长约1.5kb PCR产物,酶切结果显示所构建的重组质粒已成功地克隆了mexA基因,序列分析结果与PA01mexA序列相同.SDS-PAGE检测表达产物,在相对分子量40kDa处有表达条带,诱导表达之菌体,超声破碎后,目的蛋白主要以包涵体形式存在.结论 获得mexA基因,并在E.coliM15中成功表达.融合蛋白纯化后作免疫原,为制备多克隆抗体打下基础.
目的 構建MexA原覈錶達載體,併實現MexA原覈錶達、純化.方法 從多重耐藥的銅綠假單胞菌抽提DNA,經PCR擴增齣mexA1基因與PUC18剋隆載體連接,PCR、酶切及測序鑒定,再經PCR擴增齣mexA基因,酶切純化後剋隆到原覈錶達載體PQE30,構建重組錶達載體PQE30/mexA,PCR及酶切鑒定,IPTG誘導錶達,SDS-PAGE、Western blot檢測有無蛋白的錶達.結果 已穫得長約1.5kb PCR產物,酶切結果顯示所構建的重組質粒已成功地剋隆瞭mexA基因,序列分析結果與PA01mexA序列相同.SDS-PAGE檢測錶達產物,在相對分子量40kDa處有錶達條帶,誘導錶達之菌體,超聲破碎後,目的蛋白主要以包涵體形式存在.結論 穫得mexA基因,併在E.coliM15中成功錶達.融閤蛋白純化後作免疫原,為製備多剋隆抗體打下基礎.
목적 구건MexA원핵표체재체,병실현MexA원핵표체、순화.방법 종다중내약적동록가단포균추제DNA,경PCR확증출mexA1기인여PUC18극륭재체련접,PCR、매절급측서감정,재경PCR확증출mexA기인,매절순화후극륭도원핵표체재체PQE30,구건중조표체재체PQE30/mexA,PCR급매절감정,IPTG유도표체,SDS-PAGE、Western blot검측유무단백적표체.결과 이획득장약1.5kb PCR산물,매절결과현시소구건적중조질립이성공지극륭료mexA기인,서렬분석결과여PA01mexA서렬상동.SDS-PAGE검측표체산물,재상대분자량40kDa처유표체조대,유도표체지균체,초성파쇄후,목적단백주요이포함체형식존재.결론 획득mexA기인,병재E.coliM15중성공표체.융합단백순화후작면역원,위제비다극륭항체타하기출.
