贵州医药
貴州醫藥
귀주의약
GUIZHOU MEDICAL JOURNAL
2012年
9期
779-782
,共4页
夏宇%盛瑾%朱铠%过常发%王春生
夏宇%盛瑾%硃鎧%過常髮%王春生
하우%성근%주개%과상발%왕춘생
间充质干细胞%骨髓%贴壁法分离培养
間充質榦細胞%骨髓%貼壁法分離培養
간충질간세포%골수%첩벽법분리배양
目的 建立一种体外纯化及培养扩增C57/BL6小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的简单有效方法.方法 利用骨髓MSCs在体外培养皿中培养时具有贴壁生长的特性,采用全骨髓法分离培养C57/BL6小鼠MSCs,通过体外培养和连续传代达到纯化和扩增MSCs目的,并与以优化.倒置显微镜下观察细胞形态变化情况；利用四唑盐比色(MTT)法测定MSCs的生长曲线；流式细胞仪(FCM)鉴定MSCs膜抗原.结果 C57/BL6小鼠胫骨全骨髓细胞在分离后与含15％优质胎牛血清DMEM/F12培养基混合,约5～10 min后即可见大量有核细胞贴壁,细胞形态为圆形,24～48 h后可见贴壁细胞转变为椭圆形、多角形及短梭形,7～12 d时细胞呈长梭形并达到90％单层融合.通过传代细胞进一步纯化及扩增.细胞传代后2d内处于潜伏期,3d后进入生长期,5d后进入平台期.第4代MSCs进行FCM检测CD45、CD44、CD29和CD54阳性率分别为2.4％、83.2％、95.1％和94.1％.激光免疫共聚焦结果显示造血细胞表面标物CD34和CD45阴性,而CD44和CD105阳性.结论 C57/BL6小鼠全骨髓贴壁法能有效得到分离纯化的MSCs,用此方法培养的C57/BL6小鼠MSCs生长稳定,增殖能力活跃,具有MSCs的一般生物学特性,可以为组织工程提供理想的种子细胞.
目的 建立一種體外純化及培養擴增C57/BL6小鼠骨髓間充質榦細胞(MSCs)的簡單有效方法.方法 利用骨髓MSCs在體外培養皿中培養時具有貼壁生長的特性,採用全骨髓法分離培養C57/BL6小鼠MSCs,通過體外培養和連續傳代達到純化和擴增MSCs目的,併與以優化.倒置顯微鏡下觀察細胞形態變化情況；利用四唑鹽比色(MTT)法測定MSCs的生長麯線；流式細胞儀(FCM)鑒定MSCs膜抗原.結果 C57/BL6小鼠脛骨全骨髓細胞在分離後與含15％優質胎牛血清DMEM/F12培養基混閤,約5～10 min後即可見大量有覈細胞貼壁,細胞形態為圓形,24～48 h後可見貼壁細胞轉變為橢圓形、多角形及短梭形,7～12 d時細胞呈長梭形併達到90％單層融閤.通過傳代細胞進一步純化及擴增.細胞傳代後2d內處于潛伏期,3d後進入生長期,5d後進入平檯期.第4代MSCs進行FCM檢測CD45、CD44、CD29和CD54暘性率分彆為2.4％、83.2％、95.1％和94.1％.激光免疫共聚焦結果顯示造血細胞錶麵標物CD34和CD45陰性,而CD44和CD105暘性.結論 C57/BL6小鼠全骨髓貼壁法能有效得到分離純化的MSCs,用此方法培養的C57/BL6小鼠MSCs生長穩定,增殖能力活躍,具有MSCs的一般生物學特性,可以為組織工程提供理想的種子細胞.
목적 건립일충체외순화급배양확증C57/BL6소서골수간충질간세포(MSCs)적간단유효방법.방법 이용골수MSCs재체외배양명중배양시구유첩벽생장적특성,채용전골수법분리배양C57/BL6소서MSCs,통과체외배양화련속전대체도순화화확증MSCs목적,병여이우화.도치현미경하관찰세포형태변화정황；이용사서염비색(MTT)법측정MSCs적생장곡선；류식세포의(FCM)감정MSCs막항원.결과 C57/BL6소서경골전골수세포재분리후여함15％우질태우혈청DMEM/F12배양기혼합,약5～10 min후즉가견대량유핵세포첩벽,세포형태위원형,24～48 h후가견첩벽세포전변위타원형、다각형급단사형,7～12 d시세포정장사형병체도90％단층융합.통과전대세포진일보순화급확증.세포전대후2d내처우잠복기,3d후진입생장기,5d후진입평태기.제4대MSCs진행FCM검측CD45、CD44、CD29화CD54양성솔분별위2.4％、83.2％、95.1％화94.1％.격광면역공취초결과현시조혈세포표면표물CD34화CD45음성,이CD44화CD105양성.결론 C57/BL6소서전골수첩벽법능유효득도분리순화적MSCs,용차방법배양적C57/BL6소서MSCs생장은정,증식능력활약,구유MSCs적일반생물학특성,가이위조직공정제공이상적충자세포.
