东北农业大学学报
東北農業大學學報
동북농업대학학보
JOURNAL OF NORTHEAST AGRICULTURAL UNIVERSITY
2013年
3期
123-127
,共5页
路义鑫%林宇%李镝锐%汪明
路義鑫%林宇%李鏑銳%汪明
로의흠%림우%리적예%왕명
捻转血矛线虫%H11%克隆%表达
撚轉血矛線蟲%H11%剋隆%錶達
념전혈모선충%H11%극륭%표체
Haemonchus contortus%H11%clone%expression
根据GenBank上发表的捻转血矛线虫核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR方法克隆捻转血矛线虫HLJ株H11基因.结果表明,H11ORF核苷酸长为2 919 bp,编码972个氨基酸残基.经分析,捻转血矛线虫HLJ株H11与X94187、AY247714、AY819650同源性分别为99.14％、98.49％和99.59％；H11基因含有4个糖基化位点和1个Zn结合功能域；4个糖基化住点分别位于99～102aa、227～230aa、549～552aa和858～861aa处；Zn结合功能域位于376～385aa处.参照捻转血矛线虫HLJ株H11序列设计引物,扩增H11ORF 451～2 919 bp一段胞外域序列,构建包含3个糖基化位点和1个Zn结合功能域pGEX-6P-1-H11原核表达质粒,在大肠杆菌表达菌Rosetta(DE3)中进行表达.SDS-PAGE结果表示,融合蛋白分子质量约为118 ku,以包涵体形式存在.免疫印迹实验未出现目的条带,说明H11确是一种隐蔽抗原.
根據GenBank上髮錶的撚轉血矛線蟲覈苷痠序列設計引物,採用RT-PCR方法剋隆撚轉血矛線蟲HLJ株H11基因.結果錶明,H11ORF覈苷痠長為2 919 bp,編碼972箇氨基痠殘基.經分析,撚轉血矛線蟲HLJ株H11與X94187、AY247714、AY819650同源性分彆為99.14％、98.49％和99.59％；H11基因含有4箇糖基化位點和1箇Zn結閤功能域；4箇糖基化住點分彆位于99～102aa、227～230aa、549～552aa和858～861aa處；Zn結閤功能域位于376～385aa處.參照撚轉血矛線蟲HLJ株H11序列設計引物,擴增H11ORF 451～2 919 bp一段胞外域序列,構建包含3箇糖基化位點和1箇Zn結閤功能域pGEX-6P-1-H11原覈錶達質粒,在大腸桿菌錶達菌Rosetta(DE3)中進行錶達.SDS-PAGE結果錶示,融閤蛋白分子質量約為118 ku,以包涵體形式存在.免疫印跡實驗未齣現目的條帶,說明H11確是一種隱蔽抗原.
근거GenBank상발표적념전혈모선충핵감산서렬설계인물,채용RT-PCR방법극륭념전혈모선충HLJ주H11기인.결과표명,H11ORF핵감산장위2 919 bp,편마972개안기산잔기.경분석,념전혈모선충HLJ주H11여X94187、AY247714、AY819650동원성분별위99.14％、98.49％화99.59％；H11기인함유4개당기화위점화1개Zn결합공능역；4개당기화주점분별위우99～102aa、227～230aa、549～552aa화858～861aa처；Zn결합공능역위우376～385aa처.삼조념전혈모선충HLJ주H11서렬설계인물,확증H11ORF 451～2 919 bp일단포외역서렬,구건포함3개당기화위점화1개Zn결합공능역pGEX-6P-1-H11원핵표체질립,재대장간균표체균Rosetta(DE3)중진행표체.SDS-PAGE결과표시,융합단백분자질량약위118 ku,이포함체형식존재.면역인적실험미출현목적조대,설명H11학시일충은폐항원.
