东北农业大学学报
東北農業大學學報
동북농업대학학보
JOURNAL OF NORTHEAST AGRICULTURAL UNIVERSITY
2013年
3期
83-88
,共6页
李德山%曹荣邱%高华山%任桂萍%刘明瑶
李德山%曹榮邱%高華山%任桂萍%劉明瑤
리덕산%조영구%고화산%임계평%류명요
FGF21%定点突变%表达量%促进葡萄糖吸收活性
FGF21%定點突變%錶達量%促進葡萄糖吸收活性
FGF21%정점돌변%표체량%촉진포도당흡수활성
probiotics%classify%mechanism of action%application
FGF21是一类具有重要糖脂代谢调节功能因子,是治疗2型糖尿病候选药物.但其在大肠杆菌中表达量低且主要以包涵体形式表达,为此根据FGF21与FGF家族同源序列差异,对FGF21进行定点突变以提高其表达量.以pSUMO-FGF21表达载体为模板,在突变位点两端设计引物,采用定点突变方法,将FGF21141位甘氨酸(G)突变为苯丙氨酸(F),构建突变FGF21表达载体pSUMO-mutFGF21；在大肠杆菌中进行表达,纯化mutFGF21蛋白.利用SDS-PAGE和Western blot鉴定分析突变蛋白,HepG2细胞糖吸收试验检测突变蛋白活性.结果成功对pSUMO-hFGF21进行突变,突变蛋白在大肠杆菌中成功表达,经SDS-PAGE分析,主要以可溶形式表达；与野生型FGF21(hFGF21)相比,表达量提高50％.Western blot表明mutFGF21可与FGF21抗体特异性反应.糖吸收试验显示mutFGF21具有与hFGF21一样生物活性并存在剂量依赖性,相比hFGF21,mutFGF21活性略有提高,说明定点突变FGF21(141位G突变为F)可显著提高FGF21表达量.
FGF21是一類具有重要糖脂代謝調節功能因子,是治療2型糖尿病候選藥物.但其在大腸桿菌中錶達量低且主要以包涵體形式錶達,為此根據FGF21與FGF傢族同源序列差異,對FGF21進行定點突變以提高其錶達量.以pSUMO-FGF21錶達載體為模闆,在突變位點兩耑設計引物,採用定點突變方法,將FGF21141位甘氨痠(G)突變為苯丙氨痠(F),構建突變FGF21錶達載體pSUMO-mutFGF21；在大腸桿菌中進行錶達,純化mutFGF21蛋白.利用SDS-PAGE和Western blot鑒定分析突變蛋白,HepG2細胞糖吸收試驗檢測突變蛋白活性.結果成功對pSUMO-hFGF21進行突變,突變蛋白在大腸桿菌中成功錶達,經SDS-PAGE分析,主要以可溶形式錶達；與野生型FGF21(hFGF21)相比,錶達量提高50％.Western blot錶明mutFGF21可與FGF21抗體特異性反應.糖吸收試驗顯示mutFGF21具有與hFGF21一樣生物活性併存在劑量依賴性,相比hFGF21,mutFGF21活性略有提高,說明定點突變FGF21(141位G突變為F)可顯著提高FGF21錶達量.
FGF21시일류구유중요당지대사조절공능인자,시치료2형당뇨병후선약물.단기재대장간균중표체량저차주요이포함체형식표체,위차근거FGF21여FGF가족동원서렬차이,대FGF21진행정점돌변이제고기표체량.이pSUMO-FGF21표체재체위모판,재돌변위점량단설계인물,채용정점돌변방법,장FGF21141위감안산(G)돌변위분병안산(F),구건돌변FGF21표체재체pSUMO-mutFGF21；재대장간균중진행표체,순화mutFGF21단백.이용SDS-PAGE화Western blot감정분석돌변단백,HepG2세포당흡수시험검측돌변단백활성.결과성공대pSUMO-hFGF21진행돌변,돌변단백재대장간균중성공표체,경SDS-PAGE분석,주요이가용형식표체；여야생형FGF21(hFGF21)상비,표체량제고50％.Western blot표명mutFGF21가여FGF21항체특이성반응.당흡수시험현시mutFGF21구유여hFGF21일양생물활성병존재제량의뢰성,상비hFGF21,mutFGF21활성략유제고,설명정점돌변FGF21(141위G돌변위F)가현저제고FGF21표체량.
