作物学报
作物學報
작물학보
ACTA AGRONOMICA SINICA
2012年
12期
2162-2169
,共8页
宋明%许俊强%孙梓健%汤青林%王志敏%王小佳
宋明%許俊彊%孫梓健%湯青林%王誌敏%王小佳
송명%허준강%손재건%탕청림%왕지민%왕소가
结球甘蓝%花粉%类钙调素蛋白49%表达分析
結毬甘藍%花粉%類鈣調素蛋白49%錶達分析
결구감람%화분%류개조소단백49%표체분석
以结球甘蓝E1为材料,提取花粉萌发前和萌发后的混合花粉总蛋白,总蛋白双向电泳后通过MALDI-TOF-MS鉴定分析差异点,根据差异点分析结果,利用同源克隆得到甘蓝BoCML49基因707 bp的cDNA片段.通过对BoCML49基因的qPCR分析表明其表达量在花粉萌发前约为萌发后的2.73倍,表明BoCML49基因在花粉萌发后表达下调.通过5’-Race和3’-Race分别得到550 bp和721 bp大小cDNA片段,最终得到结球甘蓝BoCML49全长cDNA序列,开放阅读框位于125～1 078 bp处,加尾信号(AATAAA)位于第1 222 bp处.通过cDNA推导得到的氨基酸序列分析表明,BoCML49编码317个氨基酸残基,预测分子量为33.51 kD,pI为6.93,经Smart-embl预测其含2个重要的EF-hand结构,分别位于序列第150～178和第216～244位氨基酸残基处,预测结果显示其含有7个α-螺旋和10个β-折叠结构.系统发育树表明结球甘蓝BoCML49与拟南芥AtCML49和AtCML50的亲缘关系较近.BoCML49基因的原核表达得到37.55 kD的融合蛋白.
以結毬甘藍E1為材料,提取花粉萌髮前和萌髮後的混閤花粉總蛋白,總蛋白雙嚮電泳後通過MALDI-TOF-MS鑒定分析差異點,根據差異點分析結果,利用同源剋隆得到甘藍BoCML49基因707 bp的cDNA片段.通過對BoCML49基因的qPCR分析錶明其錶達量在花粉萌髮前約為萌髮後的2.73倍,錶明BoCML49基因在花粉萌髮後錶達下調.通過5’-Race和3’-Race分彆得到550 bp和721 bp大小cDNA片段,最終得到結毬甘藍BoCML49全長cDNA序列,開放閱讀框位于125～1 078 bp處,加尾信號(AATAAA)位于第1 222 bp處.通過cDNA推導得到的氨基痠序列分析錶明,BoCML49編碼317箇氨基痠殘基,預測分子量為33.51 kD,pI為6.93,經Smart-embl預測其含2箇重要的EF-hand結構,分彆位于序列第150～178和第216～244位氨基痠殘基處,預測結果顯示其含有7箇α-螺鏇和10箇β-摺疊結構.繫統髮育樹錶明結毬甘藍BoCML49與擬南芥AtCML49和AtCML50的親緣關繫較近.BoCML49基因的原覈錶達得到37.55 kD的融閤蛋白.
이결구감람E1위재료,제취화분맹발전화맹발후적혼합화분총단백,총단백쌍향전영후통과MALDI-TOF-MS감정분석차이점,근거차이점분석결과,이용동원극륭득도감람BoCML49기인707 bp적cDNA편단.통과대BoCML49기인적qPCR분석표명기표체량재화분맹발전약위맹발후적2.73배,표명BoCML49기인재화분맹발후표체하조.통과5’-Race화3’-Race분별득도550 bp화721 bp대소cDNA편단,최종득도결구감람BoCML49전장cDNA서렬,개방열독광위우125～1 078 bp처,가미신호(AATAAA)위우제1 222 bp처.통과cDNA추도득도적안기산서렬분석표명,BoCML49편마317개안기산잔기,예측분자량위33.51 kD,pI위6.93,경Smart-embl예측기함2개중요적EF-hand결구,분별위우서렬제150～178화제216～244위안기산잔기처,예측결과현시기함유7개α-라선화10개β-절첩결구.계통발육수표명결구감람BoCML49여의남개AtCML49화AtCML50적친연관계교근.BoCML49기인적원핵표체득도37.55 kD적융합단백.
