作物学报
作物學報
작물학보
ACTA AGRONOMICA SINICA
2012年
12期
2139-2146
,共8页
何美敬%刘立峰%穆国俊%侯名语%陈焕英%崔顺立
何美敬%劉立峰%穆國俊%侯名語%陳煥英%崔順立
하미경%류립봉%목국준%후명어%진환영%최순립
花生%蔗糖合酶基因%克隆%半定量RT-PCR%表达分析
花生%蔗糖閤酶基因%剋隆%半定量RT-PCR%錶達分析
화생%자당합매기인%극륭%반정량RT-PCR%표체분석
蔗糖合酶(sucrose synthase,SuSy)是蔗糖代谢途径中的关键酶,在植物生长、发育和渗透调节过程中起着重要的作用.本研究利用同源克隆、RACE和TAIL-PCR相结合的方法从花生叶片中分离了蔗糖合酶基因,命名为AhSuSy (GenBank登录号为JF346233).该基因cDNA序列全长2 790 bp,包含一个2 421 bp的开放阅读框(ORF),5’端非编码区57 bp,3’端非编码区为312 bp.根据编码区预测AhSuSy编码806个氨基酸,与大豆、拟南芥、玉米等植物中相关蛋白的氨基酸序列同源性达75％以上；成功构建了该基因的原核表达载体pET32a-AhSuSy,在IPTG诱导下得到92 kD左右的蛋白,与理论值一致.半定量RT-PCR分析表明AhSuSy在花生根、茎、叶中均有表达.利用10％PEG模拟干旱处理花生幼苗,分析胁迫后AhSuSy的转录水平,同时测定蔗糖合酶活性和蔗糖含量,发现三者均表现为处理后4～12 h逐渐升高,相关性分析显示花生中蔗糖含量与蔗糖合酶活性的相关系数达0.993 (P=0.007＜0.01),处理后12～24 h逐渐降低.推测该基因响应干旱调控,在花生抗旱胁迫中可能起着一定的作用.
蔗糖閤酶(sucrose synthase,SuSy)是蔗糖代謝途徑中的關鍵酶,在植物生長、髮育和滲透調節過程中起著重要的作用.本研究利用同源剋隆、RACE和TAIL-PCR相結閤的方法從花生葉片中分離瞭蔗糖閤酶基因,命名為AhSuSy (GenBank登錄號為JF346233).該基因cDNA序列全長2 790 bp,包含一箇2 421 bp的開放閱讀框(ORF),5’耑非編碼區57 bp,3’耑非編碼區為312 bp.根據編碼區預測AhSuSy編碼806箇氨基痠,與大豆、擬南芥、玉米等植物中相關蛋白的氨基痠序列同源性達75％以上；成功構建瞭該基因的原覈錶達載體pET32a-AhSuSy,在IPTG誘導下得到92 kD左右的蛋白,與理論值一緻.半定量RT-PCR分析錶明AhSuSy在花生根、莖、葉中均有錶達.利用10％PEG模擬榦旱處理花生幼苗,分析脅迫後AhSuSy的轉錄水平,同時測定蔗糖閤酶活性和蔗糖含量,髮現三者均錶現為處理後4～12 h逐漸升高,相關性分析顯示花生中蔗糖含量與蔗糖閤酶活性的相關繫數達0.993 (P=0.007＜0.01),處理後12～24 h逐漸降低.推測該基因響應榦旱調控,在花生抗旱脅迫中可能起著一定的作用.
자당합매(sucrose synthase,SuSy)시자당대사도경중적관건매,재식물생장、발육화삼투조절과정중기착중요적작용.본연구이용동원극륭、RACE화TAIL-PCR상결합적방법종화생협편중분리료자당합매기인,명명위AhSuSy (GenBank등록호위JF346233).해기인cDNA서렬전장2 790 bp,포함일개2 421 bp적개방열독광(ORF),5’단비편마구57 bp,3’단비편마구위312 bp.근거편마구예측AhSuSy편마806개안기산,여대두、의남개、옥미등식물중상관단백적안기산서렬동원성체75％이상；성공구건료해기인적원핵표체재체pET32a-AhSuSy,재IPTG유도하득도92 kD좌우적단백,여이론치일치.반정량RT-PCR분석표명AhSuSy재화생근、경、협중균유표체.이용10％PEG모의간한처리화생유묘,분석협박후AhSuSy적전록수평,동시측정자당합매활성화자당함량,발현삼자균표현위처리후4～12 h축점승고,상관성분석현시화생중자당함량여자당합매활성적상관계수체0.993 (P=0.007＜0.01),처리후12～24 h축점강저.추측해기인향응간한조공,재화생항한협박중가능기착일정적작용.
