西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2013年
2期
258-262
,共5页
闵自信%杜小云%宁启兰%钟楠楠%郑悦雯%韩燕%吕社民%张蕊
閔自信%杜小雲%寧啟蘭%鐘楠楠%鄭悅雯%韓燕%呂社民%張蕊
민자신%두소운%저계란%종남남%정열문%한연%려사민%장예
miRNAs%茎环引物%实时定量反转录聚合酶链反应%软骨%血浆
miRNAs%莖環引物%實時定量反轉錄聚閤酶鏈反應%軟骨%血漿
miRNAs%경배인물%실시정량반전록취합매련반응%연골%혈장
目的 比较两种实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测microRNAs (miRNAs)表达含量的技术差异,优化不同实验目的和条件下研究miRNAs表达的技术方法.方法 取21d和42d两个时间点的SD大鼠关节软骨组织,采用Trizol法提取总RNA备用.选取rno-miR-15b、rno-miR-16、rno miR 195、rno-miR-497作为研究对象,分别用茎环引物和试剂公司提供的试剂盒方法反转录总RNA,并应用实时定量PCR方法检测这些miRNAs的表达量.提取人血浆中总RNA,用上述两种RT-qPCR方法实时定量检测has-miR-16的表达量.结果 两种方法检测这些miRNAs表达量,在大鼠21d和42 d这两个时间点其表达量变化趋势相同,都呈现增高的趋势,这与我们前期Solexa测序结果相同.在血浆中的结果显示,其中茎环引物反转录方法灵敏度相对较高.结论 茎环引物法在少量几个重要的miRNAs检测中具有优势,而试剂盒方法适用于大量miRNAs的筛查.
目的 比較兩種實時定量反轉錄聚閤酶鏈反應(RT-qPCR)方法檢測microRNAs (miRNAs)錶達含量的技術差異,優化不同實驗目的和條件下研究miRNAs錶達的技術方法.方法 取21d和42d兩箇時間點的SD大鼠關節軟骨組織,採用Trizol法提取總RNA備用.選取rno-miR-15b、rno-miR-16、rno miR 195、rno-miR-497作為研究對象,分彆用莖環引物和試劑公司提供的試劑盒方法反轉錄總RNA,併應用實時定量PCR方法檢測這些miRNAs的錶達量.提取人血漿中總RNA,用上述兩種RT-qPCR方法實時定量檢測has-miR-16的錶達量.結果 兩種方法檢測這些miRNAs錶達量,在大鼠21d和42 d這兩箇時間點其錶達量變化趨勢相同,都呈現增高的趨勢,這與我們前期Solexa測序結果相同.在血漿中的結果顯示,其中莖環引物反轉錄方法靈敏度相對較高.結論 莖環引物法在少量幾箇重要的miRNAs檢測中具有優勢,而試劑盒方法適用于大量miRNAs的篩查.
목적 비교량충실시정량반전록취합매련반응(RT-qPCR)방법검측microRNAs (miRNAs)표체함량적기술차이,우화불동실험목적화조건하연구miRNAs표체적기술방법.방법 취21d화42d량개시간점적SD대서관절연골조직,채용Trizol법제취총RNA비용.선취rno-miR-15b、rno-miR-16、rno miR 195、rno-miR-497작위연구대상,분별용경배인물화시제공사제공적시제합방법반전록총RNA,병응용실시정량PCR방법검측저사miRNAs적표체량.제취인혈장중총RNA,용상술량충RT-qPCR방법실시정량검측has-miR-16적표체량.결과 량충방법검측저사miRNAs표체량,재대서21d화42 d저량개시간점기표체량변화추세상동,도정현증고적추세,저여아문전기Solexa측서결과상동.재혈장중적결과현시,기중경배인물반전록방법령민도상대교고.결론 경배인물법재소량궤개중요적miRNAs검측중구유우세,이시제합방법괄용우대량miRNAs적사사.
