CAJ | 학술논문

电转染法制备奶牛转溶葡球菌酶(Lysostaphin)和内溶素(Endolysin)基因胚胎
전전염법제비내우전용포구균매(Lysostaphin)화내용소(Endolysin)기인배태
Construction of Bovine (Bos taurus) Transgenic Cloned Embryos with Lysostaphin and Endolysin Genes by Electronic Transfection

万方数据

农业生物技术学报農業生物技術學報 농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2013年 2期 206-215 ,共10页

杨林%杜卫华%郝海生%刘岩%秦彤%赵学明%王栋%朱化彬%王宗礼

양림%두위화%학해생%류암%진동%조학명%왕동%주화빈%왕종례

溶葡萄球菌酶%内溶素%电转染%转基因%乳房炎溶葡萄毬菌酶%內溶素%電轉染%轉基因%乳房炎
용포도구균매%내용소%전전염%전기인%유방염

溶葡球菌酶(Lysostaphin)是一种含锌的单链蛋白酶,能有效地杀灭金黄色葡萄球菌.内溶素(Endolysin)是双链DNA噬菌体所特有,是一类胞壁质水解酶,具有广泛的抗菌效果.内溶素与抗生素之间有高效的协同作用.本研究通过BTX电转染和AMAXA核转染的方法将含有溶葡球菌酶(Lysostaphin)和内溶素(Endolysin)两个目的基因(Seq2和Seq3)及绿色荧光蛋白(enhencedgreenfluorescent protein,EGFP)和新霉素(neomycin,neo)两个标记基因的载体pBC1-seq2+seq3-EGFP-neo,导入牛(Bos taurus)胎儿成纤维细胞,经荧光观察、G418筛选和PCR鉴定后建立稳定转染的单克隆阳性细胞系.以其作为核供体,体细胞核移植制备转基因胚胎.通过4组不同转染程序(A-023,V-013,V-023和T-016)转染牛胎儿成纤维细胞,结果表明,转染参数T-016最适合本实验,其AMAXA转染效率(20.11％)为BTX电转染转染效率的5倍.转基因囊胚率为(20.08±4.19)％,并发育正常.本研究建立了牛胎儿成纤维细胞系,筛选出高效的转染参数,并获得了含溶葡球菌酶、内溶素的转基因细胞系和转基因囊胚,为制备抗乳房炎转基因牛及寻找防治奶牛乳房炎新途径提供了技术支持.
용포구균매(Lysostaphin)시일충함자적단련단백매,능유효지살멸금황색포도구균.내용소(Endolysin)시쌍련DNA서균체소특유,시일류포벽질수해매,구유엄범적항균효과.내용소여항생소지간유고효적협동작용.본연구통과BTX전전염화AMAXA핵전염적방법장함유용포구균매(Lysostaphin)화내용소(Endolysin)량개목적기인(Seq2화Seq3)급록색형광단백(enhencedgreenfluorescent protein,EGFP)화신매소(neomycin,neo)량개표기기인적재체pBC1-seq2+seq3-EGFP-neo,도입우(Bos taurus)태인성섬유세포,경형광관찰、G418사선화PCR감정후건립은정전염적단극륭양성세포계.이기작위핵공체,체세포핵이식제비전기인배태.통과4조불동전염정서(A-023,V-013,V-023화T-016)전염우태인성섬유세포,결과표명,전염삼수T-016최괄합본실험,기AMAXA전염효솔(20.11％)위BTX전전염전염효솔적5배.전기인낭배솔위(20.08±4.19)％,병발육정상.본연구건립료우태인성섬유세포계,사선출고효적전염삼수,병획득료함용포구균매、내용소적전기인세포계화전기인낭배,위제비항유방염전기인우급심조방치내우유방염신도경제공료기술지지.