CAJ | 학술논문

Nramp1基因在猪肺泡巨噬细胞中具有较高的组织表达特异性,本研究的目的是克隆并分析猪(Sus scrofa)Nramp1基因在肺泡巨噬细胞中的特异性表达调控元件.本研究首先利用5'RACE技术确定了Nramp1基因转录起始位点,在此基础上构建了-1 327～+86 bp区域内不同长度的嵌套缺失片段,分别连接至pGL3-BASIC载体上,构建了pLUC1430、pLUC1136、pLUC840、pLUC751、pLUC487、pLUC379、pLUC274及pLUC179共8个缺失表达载体.采用脂质体转染法,与海肾荧光素酶载体共转染猪肺泡巨噬细胞、肾细胞、脂肪前体细胞和胎儿成纤维细胞,采用双荧光素酶报告系统验证了Nramp1基因不同启动子片段的表达活性,结果表明Nramp1基因核心启动子区位于-386～-173 bp.进一步比较了pLUC487[-386～+86]启动子区在巨噬细胞、猪肾细胞、脂肪细胞和胎儿成纤维细胞中的表达活性,结果表明Nramp1基因在巨噬细胞中的表达活性极显著地高于肾细胞、脂肪细胞和成纤维细胞(P<0.01),表明Nramp1基因启动子具有较高的巨噬细胞特异性.本研究获得了能够在猪肺泡巨噬细胞中特异表达的调控元件,为进一步实现外源基因在猪肺泡巨噬细胞中的特异性表达提供了基础.
Nramp1기인재저폐포거서세포중구유교고적조직표체특이성,본연구적목적시극륭병분석저(Sus scrofa)Nramp1기인재폐포거서세포중적특이성표체조공원건.본연구수선이용5'RACE기술학정료Nramp1기인전록기시위점,재차기출상구건료-1 327～+86 bp구역내불동장도적감투결실편단,분별련접지pGL3-BASIC재체상,구건료pLUC1430、pLUC1136、pLUC840、pLUC751、pLUC487、pLUC379、pLUC274급pLUC179공8개결실표체재체.채용지질체전염법,여해신형광소매재체공전염저폐포거서세포、신세포、지방전체세포화태인성섬유세포,채용쌍형광소매보고계통험증료Nramp1기인불동계동자편단적표체활성,결과표명Nramp1기인핵심계동자구위우-386～-173 bp.진일보비교료pLUC487[-386～+86]계동자구재거서세포、저신세포、지방세포화태인성섬유세포중적표체활성,결과표명Nramp1기인재거서세포중적표체활성겁현저지고우신세포、지방세포화성섬유세포(P<0.01),표명Nramp1기인계동자구유교고적거서세포특이성.본연구획득료능구재저폐포거서세포중특이표체적조공원건,위진일보실현외원기인재저폐포거서세포중적특이성표체제공료기출.