国际检验医学杂志
國際檢驗醫學雜誌
국제검험의학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2013年
24期
3294-3296
,共3页
张乐乐%黄绍光%蒋栋能%李毅%刘飞%蒲晓允
張樂樂%黃紹光%蔣棟能%李毅%劉飛%蒲曉允
장악악%황소광%장동능%리의%류비%포효윤
GLIPR-2%慢病毒载体%RNA干扰
GLIPR-2%慢病毒載體%RNA榦擾
GLIPR-2%만병독재체%RNA간우
目的 构建人GLIPR-2基因慢病毒RNA干扰(RNAi)载体,并鉴定其感染人肝癌细胞系HepG2后缺氧条件下的GLIPR-2基因表达变化.方法 根据GLIPR-2基因序列合成siRNA片段,克隆至慢病毒载体pMAGic7.1上,转染293T细胞进行包装,收获并浓缩重组慢病毒颗粒.感染HepG2细胞,流式细胞术检测GFP的表达率,并用Western blot检测目的 蛋白在缺氧条件下的表达变化.结果 重组RNAi质粒pMAGic7.1-shRNA-GLIPR-2经菌落PCR鉴定及测序证实构建正确;稳定感染HepG2 细胞后,GFP的表达率为分别为84.48%、69.97% 和39.82%;Western blot结果显示慢病毒转染组GLIPR-2蛋白的表达水平较对照组明显降低.结论成功构建了GLIPR-2基因慢病毒RNAi载体,该载体在缺氧条件下可明显抑制目的 蛋白在HepG2细胞中表达,为进一步研究GLIPR-2的生物学功能奠定了基础.
目的 構建人GLIPR-2基因慢病毒RNA榦擾(RNAi)載體,併鑒定其感染人肝癌細胞繫HepG2後缺氧條件下的GLIPR-2基因錶達變化.方法 根據GLIPR-2基因序列閤成siRNA片段,剋隆至慢病毒載體pMAGic7.1上,轉染293T細胞進行包裝,收穫併濃縮重組慢病毒顆粒.感染HepG2細胞,流式細胞術檢測GFP的錶達率,併用Western blot檢測目的 蛋白在缺氧條件下的錶達變化.結果 重組RNAi質粒pMAGic7.1-shRNA-GLIPR-2經菌落PCR鑒定及測序證實構建正確;穩定感染HepG2 細胞後,GFP的錶達率為分彆為84.48%、69.97% 和39.82%;Western blot結果顯示慢病毒轉染組GLIPR-2蛋白的錶達水平較對照組明顯降低.結論成功構建瞭GLIPR-2基因慢病毒RNAi載體,該載體在缺氧條件下可明顯抑製目的 蛋白在HepG2細胞中錶達,為進一步研究GLIPR-2的生物學功能奠定瞭基礎.
목적 구건인GLIPR-2기인만병독RNA간우(RNAi)재체,병감정기감염인간암세포계HepG2후결양조건하적GLIPR-2기인표체변화.방법 근거GLIPR-2기인서렬합성siRNA편단,극륭지만병독재체pMAGic7.1상,전염293T세포진행포장,수획병농축중조만병독과립.감염HepG2세포,류식세포술검측GFP적표체솔,병용Western blot검측목적 단백재결양조건하적표체변화.결과 중조RNAi질립pMAGic7.1-shRNA-GLIPR-2경균락PCR감정급측서증실구건정학;은정감염HepG2 세포후,GFP적표체솔위분별위84.48%、69.97% 화39.82%;Western blot결과현시만병독전염조GLIPR-2단백적표체수평교대조조명현강저.결론성공구건료GLIPR-2기인만병독RNAi재체,해재체재결양조건하가명현억제목적 단백재HepG2세포중표체,위진일보연구GLIPR-2적생물학공능전정료기출.
