CAJ | 학술논문

目的:初步探讨HMGB1是否通过Toll like receptor-2 (TLR-2)促进小鼠系膜细胞增殖.方法:选取小鼠系膜细胞MMC为研究对象,为了确定HMGB1对小鼠系膜细胞增殖的影响,将小鼠系膜细胞随机分为正常对照组及50、100和200μg/L HMGB1刺激组,分别培养2、4、8和12 h,以BrdU掺人法检测小鼠系膜细胞的增殖水平.为了检测HMGB1对小鼠系膜细胞TLR2、PCNA、Cyclin D1、CDK4、p16表达的影响,将常规培养的MMC细胞随机分为正常对照组及100 μg/L HMGB1刺激组,分别于培养2、4、6、8和12 h收集细胞,采用Real-time PCR及Western blot检测小鼠系膜细胞TLR2、PCNA、Cyclin D1、CDK4、p16的表达变化.为了明确TLR2表达与HMGB1介导的MMC增殖中的作用,将MMC细胞随机分为正常对照组、HMGB1刺激组(100μg/L)、HMGB1刺激+pYr-3.1-shTLR2组(转染组)、HMGB1刺激+空白质粒组(空白质粒组),刺激8h收集细胞,Western blot检测pYr-3.1-shTLR2的沉默效果及细胞周期蛋白PCNA、Cyclin D1、CDK4、p16蛋白的表达变化.结果:HMGB1上调小鼠系膜细胞增殖水平;HMGB1时间依赖性上调小鼠系膜细胞TLR2的表达;HMGB1刺激能够上调小鼠系膜细胞中PCNA、Cyclin D1、CDK4mRNA及蛋白的表达,时间依赖性地降低小鼠系膜细胞中p16的表达;RNA干扰沉默TLR2表达,能够有效地下调HMGB1诱导的小鼠系膜细胞中细胞周期蛋白的表达,降低系膜细胞的增殖水平.结论:HMGB1可能通过与小鼠系膜细胞膜表面受体TLR2结合后,通过某种信号途径上调细胞周期调控蛋白Cyclin D1、CDK4的表达,并下调细胞周期依赖性激酶抑制剂p16的表达,推动细胞从G0/G1期进入S期,促使细胞增殖水平提高.
목적:초보탐토HMGB1시부통과Toll like receptor-2 (TLR-2)촉진소서계막세포증식.방법:선취소서계막세포MMC위연구대상,위료학정HMGB1대소서계막세포증식적영향,장소서계막세포수궤분위정상대조조급50、100화200μg/L HMGB1자격조,분별배양2、4、8화12 h,이BrdU참인법검측소서계막세포적증식수평.위료검측HMGB1대소서계막세포TLR2、PCNA、Cyclin D1、CDK4、p16표체적영향,장상규배양적MMC세포수궤분위정상대조조급100 μg/L HMGB1자격조,분별우배양2、4、6、8화12 h수집세포,채용Real-time PCR급Western blot검측소서계막세포TLR2、PCNA、Cyclin D1、CDK4、p16적표체변화.위료명학TLR2표체여HMGB1개도적MMC증식중적작용,장MMC세포수궤분위정상대조조、HMGB1자격조(100μg/L)、HMGB1자격+pYr-3.1-shTLR2조(전염조)、HMGB1자격+공백질립조(공백질립조),자격8h수집세포,Western blot검측pYr-3.1-shTLR2적침묵효과급세포주기단백PCNA、Cyclin D1、CDK4、p16단백적표체변화.결과:HMGB1상조소서계막세포증식수평;HMGB1시간의뢰성상조소서계막세포TLR2적표체;HMGB1자격능구상조소서계막세포중PCNA、Cyclin D1、CDK4mRNA급단백적표체,시간의뢰성지강저소서계막세포중p16적표체;RNA간우침묵TLR2표체,능구유효지하조HMGB1유도적소서계막세포중세포주기단백적표체,강저계막세포적증식수평.결론:HMGB1가능통과여소서계막세포막표면수체TLR2결합후,통과모충신호도경상조세포주기조공단백Cyclin D1、CDK4적표체,병하조세포주기의뢰성격매억제제p16적표체,추동세포종G0/G1기진입S기,촉사세포증식수평제고.