植物病理学报
植物病理學報
식물병이학보
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA
2012年
5期
466-473
,共8页
郭立新%段维军%张祥林%邓丛良%闻伟刚%李世访
郭立新%段維軍%張祥林%鄧叢良%聞偉剛%李世訪
곽립신%단유군%장상림%산총량%문위강%리세방
啤酒花潜隐类病毒%实时荧光RT-PCR%检测%TaqMan-MGB探针
啤酒花潛隱類病毒%實時熒光RT-PCR%檢測%TaqMan-MGB探針
비주화잠은류병독%실시형광RT-PCR%검측%TaqMan-MGB탐침
根据啤酒花潜隐类病毒(HpLVd)各分离物基因序列,设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,建立了对HpLVd的实时荧光RT-PCR检测方法.通过对反应体系的优化,确定了HpLVd的实时荧光RT-PCR最佳反应条件:Mg2+终浓度为5.5 mmol/L,引物终浓度为0.7μmol/L,探针终浓度为0.5μmol/L.灵敏度对比试验结果显示,实时荧光RT-PCR的灵敏度较普通RT-PCR通过琼脂糖凝胶电泳高10倍,在25 μL反应体系中,总RNA含量达到20 pg就能通过实时荧光RT-PCR检测出来.此方法也能成功检测田间样品上的啤酒花潜隐类病毒.
根據啤酒花潛隱類病毒(HpLVd)各分離物基因序列,設計併閤成1對特異性引物和1條TaqMan-MGB探針,建立瞭對HpLVd的實時熒光RT-PCR檢測方法.通過對反應體繫的優化,確定瞭HpLVd的實時熒光RT-PCR最佳反應條件:Mg2+終濃度為5.5 mmol/L,引物終濃度為0.7μmol/L,探針終濃度為0.5μmol/L.靈敏度對比試驗結果顯示,實時熒光RT-PCR的靈敏度較普通RT-PCR通過瓊脂糖凝膠電泳高10倍,在25 μL反應體繫中,總RNA含量達到20 pg就能通過實時熒光RT-PCR檢測齣來.此方法也能成功檢測田間樣品上的啤酒花潛隱類病毒.
근거비주화잠은류병독(HpLVd)각분리물기인서렬,설계병합성1대특이성인물화1조TaqMan-MGB탐침,건립료대HpLVd적실시형광RT-PCR검측방법.통과대반응체계적우화,학정료HpLVd적실시형광RT-PCR최가반응조건:Mg2+종농도위5.5 mmol/L,인물종농도위0.7μmol/L,탐침종농도위0.5μmol/L.령민도대비시험결과현시,실시형광RT-PCR적령민도교보통RT-PCR통과경지당응효전영고10배,재25 μL반응체계중,총RNA함량체도20 pg취능통과실시형광RT-PCR검측출래.차방법야능성공검측전간양품상적비주화잠은류병독.
