中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2013年
1期
13-18
,共6页
向明确%蔡雪飞%张文露%黄爱龙%胡接力
嚮明確%蔡雪飛%張文露%黃愛龍%鬍接力
향명학%채설비%장문로%황애룡%호접력
乙型肝炎病毒%逆转录聚合酶%复制%稳定细胞系
乙型肝炎病毒%逆轉錄聚閤酶%複製%穩定細胞繫
을형간염병독%역전록취합매%복제%은정세포계
目的 构建含有临床病毒株聚合酶逆转录酶(RT)区的乙肝病毒(HBV) DNA稳定复制细胞系.方法 采用巢式PCR从患者血清扩增HBV DNA片段,利用片段置换反应将该片段克隆到HBV DNA复制载体,并在该载体上引入新霉素抗性基因,在确认该重组DNA体外可复制后,将其转染HepG2细胞,G418筛选,采用real-time PCR结合ELISA及Southern blot检测初筛和鉴定HBV DNA稳定复制细胞系.结果 从患者血清扩增出的HBV DNA片段nt55～1654被成功置换到HBV复制质粒pLL相应区域,得到质粒p11;新霉素抗性基因表达片段被克隆到p11中HBV DNA下游,获得质粒p11-neo,Southern blot检测证实p11-neo可支持体外复制；p11-neo转染HepG2后,经筛选鉴定,获得了可支持HBV DNA稳定复制的细胞系3-10.结论 建立了含有临床病毒株聚合酶RT区的HBV DNA稳定复制细胞系,real-time PCR结合ELISA有助于HBV DNA稳定复制细胞系的快速初筛鉴定.
目的 構建含有臨床病毒株聚閤酶逆轉錄酶(RT)區的乙肝病毒(HBV) DNA穩定複製細胞繫.方法 採用巢式PCR從患者血清擴增HBV DNA片段,利用片段置換反應將該片段剋隆到HBV DNA複製載體,併在該載體上引入新黴素抗性基因,在確認該重組DNA體外可複製後,將其轉染HepG2細胞,G418篩選,採用real-time PCR結閤ELISA及Southern blot檢測初篩和鑒定HBV DNA穩定複製細胞繫.結果 從患者血清擴增齣的HBV DNA片段nt55～1654被成功置換到HBV複製質粒pLL相應區域,得到質粒p11;新黴素抗性基因錶達片段被剋隆到p11中HBV DNA下遊,穫得質粒p11-neo,Southern blot檢測證實p11-neo可支持體外複製；p11-neo轉染HepG2後,經篩選鑒定,穫得瞭可支持HBV DNA穩定複製的細胞繫3-10.結論 建立瞭含有臨床病毒株聚閤酶RT區的HBV DNA穩定複製細胞繫,real-time PCR結閤ELISA有助于HBV DNA穩定複製細胞繫的快速初篩鑒定.
목적 구건함유림상병독주취합매역전록매(RT)구적을간병독(HBV) DNA은정복제세포계.방법 채용소식PCR종환자혈청확증HBV DNA편단,이용편단치환반응장해편단극륭도HBV DNA복제재체,병재해재체상인입신매소항성기인,재학인해중조DNA체외가복제후,장기전염HepG2세포,G418사선,채용real-time PCR결합ELISA급Southern blot검측초사화감정HBV DNA은정복제세포계.결과 종환자혈청확증출적HBV DNA편단nt55～1654피성공치환도HBV복제질립pLL상응구역,득도질립p11;신매소항성기인표체편단피극륭도p11중HBV DNA하유,획득질립p11-neo,Southern blot검측증실p11-neo가지지체외복제；p11-neo전염HepG2후,경사선감정,획득료가지지HBV DNA은정복제적세포계3-10.결론 건립료함유림상병독주취합매RT구적HBV DNA은정복제세포계,real-time PCR결합ELISA유조우HBV DNA은정복제세포계적쾌속초사감정.
