CAJ | 학술논문

目的研究ROCK/SLUG信号通路在内皮素-1(endothelin-1,ET-1)促进人卵巢癌细胞上皮向间充质转分化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)中的作用.方法 ET-1处理人卵巢癌细胞株SK-OV-3和CaOV3,或共用ROCK的活化突变体转染细胞或加入ROCK的抑制剂Y27632,并转染含SLUG启动子的pGL3质粒与Renilla质粒.实验末用Boyden小室体外侵袭实验检测细胞侵袭能力,细胞免疫荧光染色观察细胞形态,报告基因检测试剂盒检测SLUG启动子活性,用实时定量PCR和Western bot方法检测EMT相关基因的表达.结果 ET-1诱导SK-OV-3和CaOV3发生与EMT相一致的形态和基因变化,促进其细胞侵袭力;ET-1与内皮素A受体 (endothelin A receptor,ETAR)结合,促进转录因子SLUG的转录;ET-1促进ROCK及fibronectin的表达,同时转染ROCK的活化突变体,促进ET-1诱导的fibronectin表达以及细胞侵袭力的增加.相反,ROCK抑制剂Y27632抑制ET-1对fibronectin表达以及细胞侵袭力的促进作用;转染ROCK的活化突变体,上调SLUG基因转录启动子活性促进其转录,抑制E-cadherin的转录.相反,ROCK的抑制剂Y27632抑制SLUG基因启动子的活性.结论 ET-1通过活化ROCK/SLUG通路促进人卵巢癌细胞发生EMT.
목적 연구ROCK/SLUG신호통로재내피소-1(endothelin-1,ET-1)촉진인란소암세포상피향간충질전분화(epithelial to mesenchymal transition,EMT)중적작용.방법 ET-1처리인란소암세포주SK-OV-3화CaOV3,혹공용ROCK적활화돌변체전염세포혹가입ROCK적억제제Y27632,병전염함SLUG계동자적pGL3질립여Renilla질립.실험말용Boyden소실체외침습실험검측세포침습능력,세포면역형광염색관찰세포형태,보고기인검측시제합검측SLUG계동자활성,용실시정량PCR화Western bot방법검측EMT상관기인적표체.결과 ET-1유도SK-OV-3화CaOV3발생여EMT상일치적형태화기인변화,촉진기세포침습력;ET-1여내피소A수체 (endothelin A receptor,ETAR)결합,촉진전록인자SLUG적전록;ET-1촉진ROCK급fibronectin적표체,동시전염ROCK적활화돌변체,촉진ET-1유도적fibronectin표체이급세포침습력적증가.상반,ROCK억제제Y27632억제ET-1대fibronectin표체이급세포침습력적촉진작용;전염ROCK적활화돌변체,상조SLUG기인전록계동자활성촉진기전록,억제E-cadherin적전록.상반,ROCK적억제제Y27632억제SLUG기인계동자적활성.결론 ET-1통과활화ROCK/SLUG통로촉진인란소암세포발생EMT.