解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2013年
1期
49-54
,共6页
吕洋%王海萍%刘博%吴志刚%霍艳丽%高辰玮
呂洋%王海萍%劉博%吳誌剛%霍豔麗%高辰瑋
려양%왕해평%류박%오지강%곽염려%고신위
骨髓间充质干细胞%转化生长因子β1%心肌细胞%分化%免疫组织化学%大鼠
骨髓間充質榦細胞%轉化生長因子β1%心肌細胞%分化%免疫組織化學%大鼠
골수간충질간세포%전화생장인자β1%심기세포%분화%면역조직화학%대서
目的 探讨转化生长因子β1 (TGF-β1)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)定向分化为心肌样细胞的影响.方法 取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养BMSCs,应用2、5、10、15 μg/L TGF-β1对第2代BMSCs定向诱导,相差显微镜观察细胞形态变化,应用免疫细胞化学技术检测诱导后4周BMSCs结蛋白(desmin)、α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)及心肌连接蛋白43 (Cx43)的表达情况.根据cTnT心肌源性特异性标记物的阳性率分析心肌样细胞的转化率；应用激光扫描共焦显微镜技术,检测诱导后4周BMSCs α-SCA、cTnT的表达；以半定量RT-PCR方法在诱导后7、21和28d检测心肌转录调节因子(GATA4)和心肌特异性α-肌球蛋白重链(α-MHC)的表达.结果 1.不同浓度TGF-β1诱导后的BMSCs,其形态在不同的时间段存在差异.15μg/L组和2μg/L组诱导7d的BMSCs形态变化不明显,与对照组类似,随后则逐渐转变成长柱形；5μg/L组诱导后的BMSCs于7d时形态已转变成类长柱形,28d时细胞体积则变小,呈条索状排列；10μg/L组诱导后的BMSCs类似于5μg/L组,但细胞数量相对较少.2.不同浓度TGF-β1诱导4周后的BMSCs均可见desmin、α-SCA及Cx43的阳性细胞,其中5μg/L组的阳性率均最强.各诱导组与对照组desmin、α-SCA及Cx43的阳性率差异均具有显著性(P＜0.05).3.各诱导组cTnT均有阳性表达.根据cTnT阳性率计算出的心肌样细胞转化率在5μg/L组最高,显著高于2μ g/L组(P=0.028)和15μ g/L组(P =0.000),但与10μg/L组之间差异不显著(P＞0.05).此外,各诱导组的心肌样细胞转化率均显著高于对照组(P＜0.01).4.激光扫描共焦显微镜技术检测结果显示,经TGF-β1诱导4周的BMSCsα-SCA和cTnT蛋白均定位于细胞质且呈共表达.5.RT-PCR结果显示,GATA-4于诱导后7d弱表达,21d表达增强,28d表达减弱；α-MHC在诱导后7d不表达,21d弱表达,28d表达明显.结论 TGF-β1可以诱导BMSCs获得心肌分化表型,最佳诱导浓度是5μg/L.
目的 探討轉化生長因子β1 (TGF-β1)對骨髓間充質榦細胞(BMSCs)定嚮分化為心肌樣細胞的影響.方法 取SD大鼠四肢骨骨髓,分離培養BMSCs,應用2、5、10、15 μg/L TGF-β1對第2代BMSCs定嚮誘導,相差顯微鏡觀察細胞形態變化,應用免疫細胞化學技術檢測誘導後4週BMSCs結蛋白(desmin)、α-橫紋肌肌動蛋白(α-SCA)、心肌肌鈣蛋白T(cTnT)及心肌連接蛋白43 (Cx43)的錶達情況.根據cTnT心肌源性特異性標記物的暘性率分析心肌樣細胞的轉化率；應用激光掃描共焦顯微鏡技術,檢測誘導後4週BMSCs α-SCA、cTnT的錶達；以半定量RT-PCR方法在誘導後7、21和28d檢測心肌轉錄調節因子(GATA4)和心肌特異性α-肌毬蛋白重鏈(α-MHC)的錶達.結果 1.不同濃度TGF-β1誘導後的BMSCs,其形態在不同的時間段存在差異.15μg/L組和2μg/L組誘導7d的BMSCs形態變化不明顯,與對照組類似,隨後則逐漸轉變成長柱形；5μg/L組誘導後的BMSCs于7d時形態已轉變成類長柱形,28d時細胞體積則變小,呈條索狀排列；10μg/L組誘導後的BMSCs類似于5μg/L組,但細胞數量相對較少.2.不同濃度TGF-β1誘導4週後的BMSCs均可見desmin、α-SCA及Cx43的暘性細胞,其中5μg/L組的暘性率均最彊.各誘導組與對照組desmin、α-SCA及Cx43的暘性率差異均具有顯著性(P＜0.05).3.各誘導組cTnT均有暘性錶達.根據cTnT暘性率計算齣的心肌樣細胞轉化率在5μg/L組最高,顯著高于2μ g/L組(P=0.028)和15μ g/L組(P =0.000),但與10μg/L組之間差異不顯著(P＞0.05).此外,各誘導組的心肌樣細胞轉化率均顯著高于對照組(P＜0.01).4.激光掃描共焦顯微鏡技術檢測結果顯示,經TGF-β1誘導4週的BMSCsα-SCA和cTnT蛋白均定位于細胞質且呈共錶達.5.RT-PCR結果顯示,GATA-4于誘導後7d弱錶達,21d錶達增彊,28d錶達減弱；α-MHC在誘導後7d不錶達,21d弱錶達,28d錶達明顯.結論 TGF-β1可以誘導BMSCs穫得心肌分化錶型,最佳誘導濃度是5μg/L.
목적 탐토전화생장인자β1 (TGF-β1)대골수간충질간세포(BMSCs)정향분화위심기양세포적영향.방법 취SD대서사지골골수,분리배양BMSCs,응용2、5、10、15 μg/L TGF-β1대제2대BMSCs정향유도,상차현미경관찰세포형태변화,응용면역세포화학기술검측유도후4주BMSCs결단백(desmin)、α-횡문기기동단백(α-SCA)、심기기개단백T(cTnT)급심기련접단백43 (Cx43)적표체정황.근거cTnT심기원성특이성표기물적양성솔분석심기양세포적전화솔；응용격광소묘공초현미경기술,검측유도후4주BMSCs α-SCA、cTnT적표체；이반정량RT-PCR방법재유도후7、21화28d검측심기전록조절인자(GATA4)화심기특이성α-기구단백중련(α-MHC)적표체.결과 1.불동농도TGF-β1유도후적BMSCs,기형태재불동적시간단존재차이.15μg/L조화2μg/L조유도7d적BMSCs형태변화불명현,여대조조유사,수후칙축점전변성장주형；5μg/L조유도후적BMSCs우7d시형태이전변성류장주형,28d시세포체적칙변소,정조색상배렬；10μg/L조유도후적BMSCs유사우5μg/L조,단세포수량상대교소.2.불동농도TGF-β1유도4주후적BMSCs균가견desmin、α-SCA급Cx43적양성세포,기중5μg/L조적양성솔균최강.각유도조여대조조desmin、α-SCA급Cx43적양성솔차이균구유현저성(P＜0.05).3.각유도조cTnT균유양성표체.근거cTnT양성솔계산출적심기양세포전화솔재5μg/L조최고,현저고우2μ g/L조(P=0.028)화15μ g/L조(P =0.000),단여10μg/L조지간차이불현저(P＞0.05).차외,각유도조적심기양세포전화솔균현저고우대조조(P＜0.01).4.격광소묘공초현미경기술검측결과현시,경TGF-β1유도4주적BMSCsα-SCA화cTnT단백균정위우세포질차정공표체.5.RT-PCR결과현시,GATA-4우유도후7d약표체,21d표체증강,28d표체감약；α-MHC재유도후7d불표체,21d약표체,28d표체명현.결론 TGF-β1가이유도BMSCs획득심기분화표형,최가유도농도시5μg/L.
