CAJ | 학술논문

采用饱和硫酸铵盐析和Sephadex G-200柱层析方法制备奥尼罗非鱼Oreochromis niloticus×O.aureus(体质量为500～1 000 g)免疫球蛋白(IgM),以其为抗原免疫8周龄的BALB/c小鼠,免疫3～4次后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用ELISA方法对杂交瘤进行筛选.结果表明:阳性克隆经3次亚克隆后,共获得6株针对罗非鱼IgM的单克隆抗体(mAb),分别命名为1C10、1C2、1G11、2C2、2F9和4B3,所有单抗均为IgG类,各株杂交瘤的细胞上清ELISA效价为1∶800～1∶3 200；制备4B3和1G11的腹水单抗,ELISA效价分别为1∶102 400和1∶6400.免疫印迹试验结果表明,mAb 4B3能在变性条件下识别罗非鱼IgM的重链,约在相对分子质量85 000左右.用ELISA检测4B3对罗非鱼IgM的敏感性,IgM灵敏度为10 μg/L.利用所制备的单抗4B3建立了评价无乳链球菌Streptococcus agalactiae灭活疫苗免疫罗非鱼血清抗体水平的三抗体夹心ELISA (TAS-ELISA)方法,结果表明:腹腔注射和浸泡免疫无乳链球菌灭活疫苗14 d后,两种免疫方式的罗非鱼血清抗无乳链球菌的抗体比对照组稍有增加；免疫21 d后,两种免疫方式的罗非鱼血清抗体均有明显增加；免疫35 d后增加更为显著,达到最高峰,注射组效价达1∶2 560,浸泡组达1∶640；免疫56 d后抗体开始下降,直到第98天还维持在明显高于对照组的抗体水平.本研究表明,所制备的罗非鱼IgM mAb可用于评价罗非鱼疫苗免疫效果及抗体产生规律等,具有广阔的应用前景.
채용포화류산안염석화Sephadex G-200주층석방법제비오니라비어Oreochromis niloticus×O.aureus(체질량위500～1 000 g)면역구단백(IgM),이기위항원면역8주령적BALB/c소서,면역3～4차후,취소서비세포여SP2/0골수류세포융합,용ELISA방법대잡교류진행사선.결과표명:양성극륭경3차아극륭후,공획득6주침대라비어IgM적단극륭항체(mAb),분별명명위1C10、1C2、1G11、2C2、2F9화4B3,소유단항균위IgG류,각주잡교류적세포상청ELISA효개위1∶800～1∶3 200；제비4B3화1G11적복수단항,ELISA효개분별위1∶102 400화1∶6400.면역인적시험결과표명,mAb 4B3능재변성조건하식별라비어IgM적중련,약재상대분자질량85 000좌우.용ELISA검측4B3대라비어IgM적민감성,IgM령민도위10 μg/L.이용소제비적단항4B3건립료평개무유련구균Streptococcus agalactiae멸활역묘면역라비어혈청항체수평적삼항체협심ELISA (TAS-ELISA)방법,결과표명:복강주사화침포면역무유련구균멸활역묘14 d후,량충면역방식적라비어혈청항무유련구균적항체비대조조초유증가；면역21 d후,량충면역방식적라비어혈청항체균유명현증가；면역35 d후증가경위현저,체도최고봉,주사조효개체1∶2 560,침포조체1∶640；면역56 d후항체개시하강,직도제98천환유지재명현고우대조조적항체수평.본연구표명,소제비적라비어IgM mAb가용우평개라비어역묘면역효과급항체산생규률등,구유엄활적응용전경.