肿瘤
腫瘤
종류
TUMOR
2013年
2期
150-156
,共7页
林河春%张方琳%耿沁%赵方瑜%孙磊%孔韩卫%李静%姚明
林河春%張方琳%耿沁%趙方瑜%孫磊%孔韓衛%李靜%姚明
림하춘%장방림%경심%조방유%손뢰%공한위%리정%요명
肺肿瘤%膜蛋白质类%肿瘤转移%iTRAQ
肺腫瘤%膜蛋白質類%腫瘤轉移%iTRAQ
폐종류%막단백질류%종류전이%iTRAQ
目的:筛选高转移和低转移肺腺癌细胞中差异表达的膜蛋白,以寻找肺癌的生物学标志物或治疗的潜在靶点.方法:提取具有相同来源、不同转移潜能的肺腺癌SPC-A-1和SPC-A-1 sci细胞的膜蛋白,应用核素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术标记膜蛋白,联合纳升液相色谱和串联质谱(nano liquid chromatography-tandem mass spectrometry,Nano-LC-MS/MS)分离、分析肽段,采用Proteinpilot 4.0软件对蛋白进行鉴定和定量分析,对获得的差异蛋白进行GO (Gene Ontology)分析,应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法进行验证.结果:样品进行4次Nano LC-MS/MS,鉴定出符合假阳性率＜1％的分别有1 413、1 374、1 297和1 351个蛋白,标记率＞95％,其中4次都上调的蛋白有27个(膜蛋白20个)、下调的蛋白有32个(膜蛋白25个).GO分析显示,差异蛋白的分子功能主要集中在细胞骨架蛋白结合、同源蛋白结合和酶结合.生物学进程主要集中在代谢进程和细胞定位.SPC-A-1 sci细胞中ITGA3(integrin alpha-3)、MYH9 (myosin,heavy chain 9)、PLEC1 (plectin 1)、HADHA (3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase)、HK1(hexokinase-1)、KTN1 (kinectin 1)、ESYT1 (extended synaptotagmin-like protein 1)、ALDH18A1 (aldehyde dehydrogenase 18 family,member A1)、ATP5A1 (ATP synthase alpha-subunit)、LMNB2 (lamin-B2)、CAV1(caveolin-1)和CK-19 (keratin,type Ⅰ cytoskeletal 19) mRNA的表达水平以及CLTC (clathrin,heavy chain)、HK1、LMNB2和CK-19蛋白的表达水平均高于SPC-A-1细胞,与质谱定量结果一致.结论:iTRAQ联合NanoLC-MS/MS技术能高通量地筛选与转移相关的膜蛋白,为肺腺癌患者转移的诊断和预后提供可能的生物学标志物或治疗靶点.
目的:篩選高轉移和低轉移肺腺癌細胞中差異錶達的膜蛋白,以尋找肺癌的生物學標誌物或治療的潛在靶點.方法:提取具有相同來源、不同轉移潛能的肺腺癌SPC-A-1和SPC-A-1 sci細胞的膜蛋白,應用覈素標記相對和絕對定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技術標記膜蛋白,聯閤納升液相色譜和串聯質譜(nano liquid chromatography-tandem mass spectrometry,Nano-LC-MS/MS)分離、分析肽段,採用Proteinpilot 4.0軟件對蛋白進行鑒定和定量分析,對穫得的差異蛋白進行GO (Gene Ontology)分析,應用實時熒光定量PCR和蛋白質印跡法進行驗證.結果:樣品進行4次Nano LC-MS/MS,鑒定齣符閤假暘性率＜1％的分彆有1 413、1 374、1 297和1 351箇蛋白,標記率＞95％,其中4次都上調的蛋白有27箇(膜蛋白20箇)、下調的蛋白有32箇(膜蛋白25箇).GO分析顯示,差異蛋白的分子功能主要集中在細胞骨架蛋白結閤、同源蛋白結閤和酶結閤.生物學進程主要集中在代謝進程和細胞定位.SPC-A-1 sci細胞中ITGA3(integrin alpha-3)、MYH9 (myosin,heavy chain 9)、PLEC1 (plectin 1)、HADHA (3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase)、HK1(hexokinase-1)、KTN1 (kinectin 1)、ESYT1 (extended synaptotagmin-like protein 1)、ALDH18A1 (aldehyde dehydrogenase 18 family,member A1)、ATP5A1 (ATP synthase alpha-subunit)、LMNB2 (lamin-B2)、CAV1(caveolin-1)和CK-19 (keratin,type Ⅰ cytoskeletal 19) mRNA的錶達水平以及CLTC (clathrin,heavy chain)、HK1、LMNB2和CK-19蛋白的錶達水平均高于SPC-A-1細胞,與質譜定量結果一緻.結論:iTRAQ聯閤NanoLC-MS/MS技術能高通量地篩選與轉移相關的膜蛋白,為肺腺癌患者轉移的診斷和預後提供可能的生物學標誌物或治療靶點.
목적:사선고전이화저전이폐선암세포중차이표체적막단백,이심조폐암적생물학표지물혹치료적잠재파점.방법:제취구유상동래원、불동전이잠능적폐선암SPC-A-1화SPC-A-1 sci세포적막단백,응용핵소표기상대화절대정량(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)기술표기막단백,연합납승액상색보화천련질보(nano liquid chromatography-tandem mass spectrometry,Nano-LC-MS/MS)분리、분석태단,채용Proteinpilot 4.0연건대단백진행감정화정량분석,대획득적차이단백진행GO (Gene Ontology)분석,응용실시형광정량PCR화단백질인적법진행험증.결과:양품진행4차Nano LC-MS/MS,감정출부합가양성솔＜1％적분별유1 413、1 374、1 297화1 351개단백,표기솔＞95％,기중4차도상조적단백유27개(막단백20개)、하조적단백유32개(막단백25개).GO분석현시,차이단백적분자공능주요집중재세포골가단백결합、동원단백결합화매결합.생물학진정주요집중재대사진정화세포정위.SPC-A-1 sci세포중ITGA3(integrin alpha-3)、MYH9 (myosin,heavy chain 9)、PLEC1 (plectin 1)、HADHA (3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase)、HK1(hexokinase-1)、KTN1 (kinectin 1)、ESYT1 (extended synaptotagmin-like protein 1)、ALDH18A1 (aldehyde dehydrogenase 18 family,member A1)、ATP5A1 (ATP synthase alpha-subunit)、LMNB2 (lamin-B2)、CAV1(caveolin-1)화CK-19 (keratin,type Ⅰ cytoskeletal 19) mRNA적표체수평이급CLTC (clathrin,heavy chain)、HK1、LMNB2화CK-19단백적표체수평균고우SPC-A-1세포,여질보정량결과일치.결론:iTRAQ연합NanoLC-MS/MS기술능고통량지사선여전이상관적막단백,위폐선암환자전이적진단화예후제공가능적생물학표지물혹치료파점.
