CAJ | 학술논문

目的建立一种能快速、高效、敏感、特异地检测口蹄疫病毒(FMDV)的一步法荧光定量RT-PCR检测方法.方法根据FMDV聚合酶3D基因序列比对结果,设计特异性引物和MGB探针;通过优化,得到最佳反应体系和反应条件;分别以质粒和病毒RNA为模板,构建标准曲线;并进行特异性、敏感性、重复性试验.结果该方法能特异性检测A型、O型、Asia 1型FMDV,而对猪瘟、猪蓝耳病、猪圆环病毒、猪细小病毒、猪狂犬病毒、猪乙型脑炎等病原检测结果均为阴性;构建的荧光定量标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系,检测质粒的敏感性可达83.4copies/μL,检测病毒RNA的敏感性可达7.1 fg/μL,比多重RT-PCR敏感性高10倍;对4份样品进行5次批内和批间重复检测,检测结果变异系数均小于2%.结论建立的口蹄疫病毒一步法TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于口蹄疫临床样品诊断、流行病学调查和畜产品安全监测.
목적 건립일충능쾌속、고효、민감、특이지검측구제역병독(FMDV)적일보법형광정량RT-PCR검측방법.방법 근거FMDV취합매3D기인서렬비대결과,설계특이성인물화MGB탐침;통과우화,득도최가반응체계화반응조건;분별이질립화병독RNA위모판,구건표준곡선;병진행특이성、민감성、중복성시험.결과 해방법능특이성검측A형、O형、Asia 1형FMDV,이대저온、저람이병、저원배병독、저세소병독、저광견병독、저을형뇌염등병원검측결과균위음성;구건적형광정량표준곡선Ct치여모판농도정량호적선성관계,검측질립적민감성가체83.4copies/μL,검측병독RNA적민감성가체7.1 fg/μL,비다중RT-PCR민감성고10배;대4빈양품진행5차비내화비간중복검측,검측결과변이계수균소우2%.결론 건립적구제역병독일보법TaqMan-MGB형광정량RT-PCR검측방법특이성강、민감성고、중복성호,가용우구제역림상양품진단、류행병학조사화축산품안전감측.