甘肃农业大学学报
甘肅農業大學學報
감숙농업대학학보
JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY
2013年
5期
19-23,31
,共6页
孟鹏%叶强%王萌%张德林%赵晋军
孟鵬%葉彊%王萌%張德林%趙晉軍
맹붕%협강%왕맹%장덕림%조진군
土壤%弓形虫%529 bp基因序列%半套式PCR
土壤%弓形蟲%529 bp基因序列%半套式PCR
토양%궁형충%529 bp기인서렬%반투식PCR
根据NCBI上公布的弓形虫RH株的529 bp基因序列(登录号:AF146527)用Primer Premier 5.0设计3条特异性引物TX1、TX2和TX3,建立土壤中弓形虫的半套式PCR检测方法,并将引物TX1与TX3扩增产物克隆到pMD18-T载体上进行测序.结果表明:该方法能扩增出约350 bp的片段,TX1与TX3扩增片段约520 bp,克隆到pMD18-T载体上的521 bp片段与所选取的弓形虫RH株的目的基因序列相似性100%.该检测方法特异性强,以犬新孢子虫、牛微小隐孢子虫、牛巴贝斯虫、环形泰勒虫、牛链球菌、猪链球菌、蒙氏肠球菌基因组为模板均未扩增出条带;灵敏性高,检测极限为20 fg弓形虫DNA;在22份土壤样品中检出3份阳性样品.
根據NCBI上公佈的弓形蟲RH株的529 bp基因序列(登錄號:AF146527)用Primer Premier 5.0設計3條特異性引物TX1、TX2和TX3,建立土壤中弓形蟲的半套式PCR檢測方法,併將引物TX1與TX3擴增產物剋隆到pMD18-T載體上進行測序.結果錶明:該方法能擴增齣約350 bp的片段,TX1與TX3擴增片段約520 bp,剋隆到pMD18-T載體上的521 bp片段與所選取的弓形蟲RH株的目的基因序列相似性100%.該檢測方法特異性彊,以犬新孢子蟲、牛微小隱孢子蟲、牛巴貝斯蟲、環形泰勒蟲、牛鏈毬菌、豬鏈毬菌、矇氏腸毬菌基因組為模闆均未擴增齣條帶;靈敏性高,檢測極限為20 fg弓形蟲DNA;在22份土壤樣品中檢齣3份暘性樣品.
근거NCBI상공포적궁형충RH주적529 bp기인서렬(등록호:AF146527)용Primer Premier 5.0설계3조특이성인물TX1、TX2화TX3,건립토양중궁형충적반투식PCR검측방법,병장인물TX1여TX3확증산물극륭도pMD18-T재체상진행측서.결과표명:해방법능확증출약350 bp적편단,TX1여TX3확증편단약520 bp,극륭도pMD18-T재체상적521 bp편단여소선취적궁형충RH주적목적기인서렬상사성100%.해검측방법특이성강,이견신포자충、우미소은포자충、우파패사충、배형태륵충、우련구균、저련구균、몽씨장구균기인조위모판균미확증출조대;령민성고,검측겁한위20 fg궁형충DNA;재22빈토양양품중검출3빈양성양품.