甘肃农业大学学报
甘肅農業大學學報
감숙농업대학학보
JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY
2013年
5期
43-49
,共7页
郝荣楷%张建平%党占海%赵利%李闻娟
郝榮楷%張建平%黨佔海%趙利%李聞娟
학영해%장건평%당점해%조리%리문연
亚麻%SRAP标记%正交试验%体系优化%引物筛选
亞痳%SRAP標記%正交試驗%體繫優化%引物篩選
아마%SRAP표기%정교시험%체계우화%인물사선
以亚麻叶片DNA为模板,以Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物和Taq DNA聚合酶进行4因素3水平正交试验设计,对亚麻SRAP反应体系进行优化,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了亚麻的SRAP最佳反应体系.结果表明:亚麻SRAP-PCR最佳反应体系为2.5 μL 10×Loading buffer、Mg2+浓度3.0 mmol/L、dNTPs浓度0.25 mmol/L、引物浓度0.2μmol/L、Taq DNA聚合酶1.0U、模板DNA 75 ng,总体积为25μL.各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以Mg2+浓度影响最大,Taq DNA聚合酶的影响最小.运用该体系对15份不同来源亚麻品种进行验证,证明该体系稳定可靠,并从169个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的引物组合21个.
以亞痳葉片DNA為模闆,以Mg2+濃度、dNTPs濃度、引物和Taq DNA聚閤酶進行4因素3水平正交試驗設計,對亞痳SRAP反應體繫進行優化,併比較瞭不同濃度模闆DNA對擴增效果的影響,建立瞭亞痳的SRAP最佳反應體繫.結果錶明:亞痳SRAP-PCR最佳反應體繫為2.5 μL 10×Loading buffer、Mg2+濃度3.0 mmol/L、dNTPs濃度0.25 mmol/L、引物濃度0.2μmol/L、Taq DNA聚閤酶1.0U、模闆DNA 75 ng,總體積為25μL.各因素對擴增反應結果均有不同影響,其中以Mg2+濃度影響最大,Taq DNA聚閤酶的影響最小.運用該體繫對15份不同來源亞痳品種進行驗證,證明該體繫穩定可靠,併從169箇SRAP引物組閤中篩選齣擴增條帶清晰、多態性豐富的引物組閤21箇.
이아마협편DNA위모판,이Mg2+농도、dNTPs농도、인물화Taq DNA취합매진행4인소3수평정교시험설계,대아마SRAP반응체계진행우화,병비교료불동농도모판DNA대확증효과적영향,건립료아마적SRAP최가반응체계.결과표명:아마SRAP-PCR최가반응체계위2.5 μL 10×Loading buffer、Mg2+농도3.0 mmol/L、dNTPs농도0.25 mmol/L、인물농도0.2μmol/L、Taq DNA취합매1.0U、모판DNA 75 ng,총체적위25μL.각인소대확증반응결과균유불동영향,기중이Mg2+농도영향최대,Taq DNA취합매적영향최소.운용해체계대15빈불동래원아마품충진행험증,증명해체계은정가고,병종169개SRAP인물조합중사선출확증조대청석、다태성봉부적인물조합21개.