湖北农业科学
湖北農業科學
호북농업과학
2012年
18期
4129-4133
,共5页
周礼红%陈平%赵永霞%荆雯雯%李祝%葛永仪
週禮紅%陳平%趙永霞%荊雯雯%李祝%葛永儀
주례홍%진평%조영하%형문문%리축%갈영의
红曲霉(Monascus anka)%遗传转化%限制性内切酶介导的整合(REMI)
紅麯黴(Monascus anka)%遺傳轉化%限製性內切酶介導的整閤(REMI)
홍곡매(Monascus anka)%유전전화%한제성내절매개도적정합(REMI)
为了构建限制性内切酶介导的整合(REMI)技术介导的红曲霉(Monascus anka)遗传转化系统,以潮霉素B作为抗性筛选标记,pBC-Hygro、pCB1003、pAN7-1作为转化质粒,采用REMI技术转化红曲霉.结果表明,用REMI技术介导红曲霉转化时,质粒pBC-Hygro和pCB1003适合于红曲霉的转化.环状质粒与线性质粒的转化率无显著差别;在用REMI技术介导转化时添加酶切缓冲液不利于转化;原生质体浓度为1×107～1×108个/mL时,每微克质粒可获得的潮霉素B抗性转化子为2 800～3 200个;HindⅢ介导转化时的最佳酶用量为105～120 U;在质粒用量为8μg/100 μL时转化率最高.
為瞭構建限製性內切酶介導的整閤(REMI)技術介導的紅麯黴(Monascus anka)遺傳轉化繫統,以潮黴素B作為抗性篩選標記,pBC-Hygro、pCB1003、pAN7-1作為轉化質粒,採用REMI技術轉化紅麯黴.結果錶明,用REMI技術介導紅麯黴轉化時,質粒pBC-Hygro和pCB1003適閤于紅麯黴的轉化.環狀質粒與線性質粒的轉化率無顯著差彆;在用REMI技術介導轉化時添加酶切緩遲液不利于轉化;原生質體濃度為1×107～1×108箇/mL時,每微剋質粒可穫得的潮黴素B抗性轉化子為2 800～3 200箇;HindⅢ介導轉化時的最佳酶用量為105～120 U;在質粒用量為8μg/100 μL時轉化率最高.
위료구건한제성내절매개도적정합(REMI)기술개도적홍곡매(Monascus anka)유전전화계통,이조매소B작위항성사선표기,pBC-Hygro、pCB1003、pAN7-1작위전화질립,채용REMI기술전화홍곡매.결과표명,용REMI기술개도홍곡매전화시,질립pBC-Hygro화pCB1003괄합우홍곡매적전화.배상질립여선성질립적전화솔무현저차별;재용REMI기술개도전화시첨가매절완충액불리우전화;원생질체농도위1×107～1×108개/mL시,매미극질립가획득적조매소B항성전화자위2 800～3 200개;HindⅢ개도전화시적최가매용량위105～120 U;재질립용량위8μg/100 μL시전화솔최고.
