中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2013年
2期
172-174,182
,共4页
Ngb%载体构建%SH-SY5Y细胞%转染
Ngb%載體構建%SH-SY5Y細胞%轉染
Ngb%재체구건%SH-SY5Y세포%전염
目的 克隆SD大鼠脑红蛋白(Ngb)基因至真核表达载体pAcGFP1-C1,构建表达质粒pAcGFP1-C1-Ngb,并转染至人SH-SY5Y细胞表达Ngb蛋白.方法 提取大鼠肝脏组织总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增大鼠Ngb基因,与双酶切的pAcGFP1-C1连接,从而构建pAcGFP1-C1-Ngb真核表达质粒.转染SH-SY5Y细胞,并用Western blot的方法鉴定Ngb蛋白在SH-SY5Y细胞中的表达.结果 获得SD大鼠Ngb基因全长序列和重组真核表达载体pAcGFP1-C1-Ngb.Western blot结果显示,转染pAcGFP1-C1-Ngb后的SH-SY5Y细胞Ngb基因有稳定的表达.结论 成功地克隆了SD大鼠Ngb基因、构建了pAcGFP1-C1-Ngb真核表达载体,并在人SH-SY5Y细胞中获得Ngb蛋白的稳定表达,为进一步研究Ngb基因在细胞中的功能奠定了基础.
目的 剋隆SD大鼠腦紅蛋白(Ngb)基因至真覈錶達載體pAcGFP1-C1,構建錶達質粒pAcGFP1-C1-Ngb,併轉染至人SH-SY5Y細胞錶達Ngb蛋白.方法 提取大鼠肝髒組織總RNA,採用逆轉錄聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)方法擴增大鼠Ngb基因,與雙酶切的pAcGFP1-C1連接,從而構建pAcGFP1-C1-Ngb真覈錶達質粒.轉染SH-SY5Y細胞,併用Western blot的方法鑒定Ngb蛋白在SH-SY5Y細胞中的錶達.結果 穫得SD大鼠Ngb基因全長序列和重組真覈錶達載體pAcGFP1-C1-Ngb.Western blot結果顯示,轉染pAcGFP1-C1-Ngb後的SH-SY5Y細胞Ngb基因有穩定的錶達.結論 成功地剋隆瞭SD大鼠Ngb基因、構建瞭pAcGFP1-C1-Ngb真覈錶達載體,併在人SH-SY5Y細胞中穫得Ngb蛋白的穩定錶達,為進一步研究Ngb基因在細胞中的功能奠定瞭基礎.
목적 극륭SD대서뇌홍단백(Ngb)기인지진핵표체재체pAcGFP1-C1,구건표체질립pAcGFP1-C1-Ngb,병전염지인SH-SY5Y세포표체Ngb단백.방법 제취대서간장조직총RNA,채용역전록취합매련식반응(RT-PCR)방법확증대서Ngb기인,여쌍매절적pAcGFP1-C1련접,종이구건pAcGFP1-C1-Ngb진핵표체질립.전염SH-SY5Y세포,병용Western blot적방법감정Ngb단백재SH-SY5Y세포중적표체.결과 획득SD대서Ngb기인전장서렬화중조진핵표체재체pAcGFP1-C1-Ngb.Western blot결과현시,전염pAcGFP1-C1-Ngb후적SH-SY5Y세포Ngb기인유은정적표체.결론 성공지극륭료SD대서Ngb기인、구건료pAcGFP1-C1-Ngb진핵표체재체,병재인SH-SY5Y세포중획득Ngb단백적은정표체,위진일보연구Ngb기인재세포중적공능전정료기출.
