中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2013年
2期
149-151
,共3页
GST-HDAC4%原核表达%融合蛋白
GST-HDAC4%原覈錶達%融閤蛋白
GST-HDAC4%원핵표체%융합단백
目的 构建人HDAC4蛋白与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达和纯化.方法 用EcoRI单酶切pcDNA3.1-HDAC4质粒,得到hHDAC4全长编码序列,并将其克隆至原核表达载体pGEX-5X-1构建成新载体GST-HDAC4,经鉴定完全正确后转化大肠埃希菌BL21,通过异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并纯化获得目的蛋白.Western blot检测重组质粒的表达.结果 酶切鉴定和测序结果显示,GST-HDAC4融合蛋白原核表达载体构建成功.考马斯亮蓝染色和Western blot结果显示,成功获得有生物活性的GST-HDAC4融合蛋白.结论 成功构建了HDAC4原核表达载体,获得有生物活性的GST-HDAC4蛋白.
目的 構建人HDAC4蛋白與穀胱甘肽轉移酶(GST)重組的融閤蛋白原覈錶達載體併進行錶達和純化.方法 用EcoRI單酶切pcDNA3.1-HDAC4質粒,得到hHDAC4全長編碼序列,併將其剋隆至原覈錶達載體pGEX-5X-1構建成新載體GST-HDAC4,經鑒定完全正確後轉化大腸埃希菌BL21,通過異丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)誘導錶達,併純化穫得目的蛋白.Western blot檢測重組質粒的錶達.結果 酶切鑒定和測序結果顯示,GST-HDAC4融閤蛋白原覈錶達載體構建成功.攷馬斯亮藍染色和Western blot結果顯示,成功穫得有生物活性的GST-HDAC4融閤蛋白.結論 成功構建瞭HDAC4原覈錶達載體,穫得有生物活性的GST-HDAC4蛋白.
목적 구건인HDAC4단백여곡광감태전이매(GST)중조적융합단백원핵표체재체병진행표체화순화.방법 용EcoRI단매절pcDNA3.1-HDAC4질립,득도hHDAC4전장편마서렬,병장기극륭지원핵표체재체pGEX-5X-1구건성신재체GST-HDAC4,경감정완전정학후전화대장애희균BL21,통과이병기류대-β-D반유당감(IPTG)유도표체,병순화획득목적단백.Western blot검측중조질립적표체.결과 매절감정화측서결과현시,GST-HDAC4융합단백원핵표체재체구건성공.고마사량람염색화Western blot결과현시,성공획득유생물활성적GST-HDAC4융합단백.결론 성공구건료HDAC4원핵표체재체,획득유생물활성적GST-HDAC4단백.
