中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2013年
2期
143-148
,共6页
李晓航%张佳林%李乐%康铁利%程颖%石蕊%张城硕%赵宁%刘永锋
李曉航%張佳林%李樂%康鐵利%程穎%石蕊%張城碩%趙寧%劉永鋒
리효항%장가림%리악%강철리%정영%석예%장성석%조저%류영봉
胰岛移植%永生化%电融合%杂交胰岛β细胞系
胰島移植%永生化%電融閤%雜交胰島β細胞繫
이도이식%영생화%전융합%잡교이도β세포계
目的 通过应用基因转染及细胞融合技术构建永生化细胞,建立1种功能良好、无致瘤性、增殖可控的杂交胰岛β细胞系.方法 通过脂质体介导逆转录病毒载体SSR69转染至原代成纤维细胞中,筛选稳定表达SV40 LTag的永生化细胞.提取大鼠胰岛,通过胰蛋白酶及DNA酶裂解成单胰岛细胞.对永生化成纤维细胞及单个胰岛β细胞进行电融合,通过有限稀释法获得杂交胰岛β细胞克隆.比较杂交及正常β细胞内胰岛素的含量及对葡萄糖刺激胰岛素释放反应.通过RT-PCR及Western blot分析杂交胰岛β细胞中SV40 LTag、insulin、葡萄糖激酶(GK)及葡萄糖转运体-2(Glut-2)基因的表达.结果 建立的永生化成纤维细胞系的增殖能力明显优于原代成纤维细胞(P＜0.05).成功获得杂交胰岛β细胞克隆,其细胞呈短梭形或扁圆形,且具有贴壁生长等特性.透射电子显微镜下可见细胞内胰岛素分泌颗粒,杂交与正常胰岛β细胞之间细胞内胰岛素含量、胰岛素释放指数及insulin、GK、Glut-2蛋白及mRNA表达水平无统计学差异(P＞0.05),但2种细胞内insulin、GK、Glut-2的表达水平显著高于RIN-m5F细胞(P＜0.05).结论 可通过永生化成纤维细胞及单个胰岛β细胞电融合诱导生成杂交胰岛β细胞,且杂交细胞能够对葡萄糖的变化产生应答反应.
目的 通過應用基因轉染及細胞融閤技術構建永生化細胞,建立1種功能良好、無緻瘤性、增殖可控的雜交胰島β細胞繫.方法 通過脂質體介導逆轉錄病毒載體SSR69轉染至原代成纖維細胞中,篩選穩定錶達SV40 LTag的永生化細胞.提取大鼠胰島,通過胰蛋白酶及DNA酶裂解成單胰島細胞.對永生化成纖維細胞及單箇胰島β細胞進行電融閤,通過有限稀釋法穫得雜交胰島β細胞剋隆.比較雜交及正常β細胞內胰島素的含量及對葡萄糖刺激胰島素釋放反應.通過RT-PCR及Western blot分析雜交胰島β細胞中SV40 LTag、insulin、葡萄糖激酶(GK)及葡萄糖轉運體-2(Glut-2)基因的錶達.結果 建立的永生化成纖維細胞繫的增殖能力明顯優于原代成纖維細胞(P＜0.05).成功穫得雜交胰島β細胞剋隆,其細胞呈短梭形或扁圓形,且具有貼壁生長等特性.透射電子顯微鏡下可見細胞內胰島素分泌顆粒,雜交與正常胰島β細胞之間細胞內胰島素含量、胰島素釋放指數及insulin、GK、Glut-2蛋白及mRNA錶達水平無統計學差異(P＞0.05),但2種細胞內insulin、GK、Glut-2的錶達水平顯著高于RIN-m5F細胞(P＜0.05).結論 可通過永生化成纖維細胞及單箇胰島β細胞電融閤誘導生成雜交胰島β細胞,且雜交細胞能夠對葡萄糖的變化產生應答反應.
목적 통과응용기인전염급세포융합기술구건영생화세포,건립1충공능량호、무치류성、증식가공적잡교이도β세포계.방법 통과지질체개도역전록병독재체SSR69전염지원대성섬유세포중,사선은정표체SV40 LTag적영생화세포.제취대서이도,통과이단백매급DNA매렬해성단이도세포.대영생화성섬유세포급단개이도β세포진행전융합,통과유한희석법획득잡교이도β세포극륭.비교잡교급정상β세포내이도소적함량급대포도당자격이도소석방반응.통과RT-PCR급Western blot분석잡교이도β세포중SV40 LTag、insulin、포도당격매(GK)급포도당전운체-2(Glut-2)기인적표체.결과 건립적영생화성섬유세포계적증식능력명현우우원대성섬유세포(P＜0.05).성공획득잡교이도β세포극륭,기세포정단사형혹편원형,차구유첩벽생장등특성.투사전자현미경하가견세포내이도소분비과립,잡교여정상이도β세포지간세포내이도소함량、이도소석방지수급insulin、GK、Glut-2단백급mRNA표체수평무통계학차이(P＞0.05),단2충세포내insulin、GK、Glut-2적표체수평현저고우RIN-m5F세포(P＜0.05).결론 가통과영생화성섬유세포급단개이도β세포전융합유도생성잡교이도β세포,차잡교세포능구대포도당적변화산생응답반응.
