山东科学
山東科學
산동과학
SHANDONG SCIENCE
2013年
2期
41-47
,共7页
郭凯%赵晓燕%周红姿%陈凯%李纪顺%陈泉%杨合同
郭凱%趙曉燕%週紅姿%陳凱%李紀順%陳泉%楊閤同
곽개%조효연%주홍자%진개%리기순%진천%양합동
人促黄体激素释放激素%绿脓杆菌外毒素A%可溶性表达%表达菌株
人促黃體激素釋放激素%綠膿桿菌外毒素A%可溶性錶達%錶達菌株
인촉황체격소석방격소%록농간균외독소A%가용성표체%표체균주
以人促性腺激素-铜绿假单胞菌外毒素A衍生物(GnRH-PE39KDEL)为研究对象,根据大肠杆菌密码子偏好性优化,通过基因合成的方法获得重组蛋白核酸序列,连接至pET-24b载体中,并转化入大肠杆菌BL21 (DE3)及BL21(DE3)plyS中进行诱导表达.结果显示,在含有2 mg/mL葡萄糖的LB培养基中37℃培养至OD600约为0.6h,加入0.2 mmol/L IPTG在30℃诱导2h后,重组蛋白可以实现可溶性高表达.工程菌经超声波破碎、高速离心后,经镍柱纯化和脱盐后得到重组蛋白,蛋白纯度达到95％以上,蛋白最终得率在2.6 mg/g菌体.重组蛋白经IC50检测,可以较好地抑制肿瘤细胞株的生长.
以人促性腺激素-銅綠假單胞菌外毒素A衍生物(GnRH-PE39KDEL)為研究對象,根據大腸桿菌密碼子偏好性優化,通過基因閤成的方法穫得重組蛋白覈痠序列,連接至pET-24b載體中,併轉化入大腸桿菌BL21 (DE3)及BL21(DE3)plyS中進行誘導錶達.結果顯示,在含有2 mg/mL葡萄糖的LB培養基中37℃培養至OD600約為0.6h,加入0.2 mmol/L IPTG在30℃誘導2h後,重組蛋白可以實現可溶性高錶達.工程菌經超聲波破碎、高速離心後,經鎳柱純化和脫鹽後得到重組蛋白,蛋白純度達到95％以上,蛋白最終得率在2.6 mg/g菌體.重組蛋白經IC50檢測,可以較好地抑製腫瘤細胞株的生長.
이인촉성선격소-동록가단포균외독소A연생물(GnRH-PE39KDEL)위연구대상,근거대장간균밀마자편호성우화,통과기인합성적방법획득중조단백핵산서렬,련접지pET-24b재체중,병전화입대장간균BL21 (DE3)급BL21(DE3)plyS중진행유도표체.결과현시,재함유2 mg/mL포도당적LB배양기중37℃배양지OD600약위0.6h,가입0.2 mmol/L IPTG재30℃유도2h후,중조단백가이실현가용성고표체.공정균경초성파파쇄、고속리심후,경얼주순화화탈염후득도중조단백,단백순도체도95％이상,단백최종득솔재2.6 mg/g균체.중조단백경IC50검측,가이교호지억제종류세포주적생장.
