色谱
色譜
색보
CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY
2013年
2期
151-154
,共4页
侯清华%宋淑亮%梁浩%王伟莉%吉爱国
侯清華%宋淑亮%樑浩%王偉莉%吉愛國
후청화%송숙량%량호%왕위리%길애국
金属螯合亲和色谱%凝胶排阻色谱%增强型绿色荧光蛋白%分离%纯化
金屬螯閤親和色譜%凝膠排阻色譜%增彊型綠色熒光蛋白%分離%純化
금속오합친화색보%응효배조색보%증강형록색형광단백%분리%순화
增强型绿色荧光蛋白(EGFP)是生物领域常用的标记物.在前期成功克隆表达EGFP的基础上,本实验建立了两步分离纯化EGFP的色谱方法,并验证其分离纯化效果,检验EGFP的活性.首先用金属螯合亲和色谱柱HisTrap HP对EGFP的重组菌体破碎上清液进行初步分离,再用葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephadex G-10 HR对其进行脱盐纯化.采用丙烯葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephacryl S-300 HR和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测分离纯化后的EGFP纯度.最后通过荧光分光检测器和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(NativePAGE)验证分离纯化后的EGFP是否具有荧光活性.结果表明该方法可以简便快速地分离纯化EGFP,纯度超过98％,同时保持了EGFP的荧光活性.
增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)是生物領域常用的標記物.在前期成功剋隆錶達EGFP的基礎上,本實驗建立瞭兩步分離純化EGFP的色譜方法,併驗證其分離純化效果,檢驗EGFP的活性.首先用金屬螯閤親和色譜柱HisTrap HP對EGFP的重組菌體破碎上清液進行初步分離,再用葡聚糖凝膠排阻色譜柱Sephadex G-10 HR對其進行脫鹽純化.採用丙烯葡聚糖凝膠排阻色譜柱Sephacryl S-300 HR和十二烷基磺痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢測分離純化後的EGFP純度.最後通過熒光分光檢測器和非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(NativePAGE)驗證分離純化後的EGFP是否具有熒光活性.結果錶明該方法可以簡便快速地分離純化EGFP,純度超過98％,同時保持瞭EGFP的熒光活性.
증강형록색형광단백(EGFP)시생물영역상용적표기물.재전기성공극륭표체EGFP적기출상,본실험건립료량보분리순화EGFP적색보방법,병험증기분리순화효과,검험EGFP적활성.수선용금속오합친화색보주HisTrap HP대EGFP적중조균체파쇄상청액진행초보분리,재용포취당응효배조색보주Sephadex G-10 HR대기진행탈염순화.채용병희포취당응효배조색보주Sephacryl S-300 HR화십이완기광산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)검측분리순화후적EGFP순도.최후통과형광분광검측기화비변성취병희선알응효전영(NativePAGE)험증분리순화후적EGFP시부구유형광활성.결과표명해방법가이간편쾌속지분리순화EGFP,순도초과98％,동시보지료EGFP적형광활성.
