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CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY
2013年
2期
102-110
,共9页
张姣%周廉淇%田芳%张养军%钱小红
張姣%週廉淇%田芳%張養軍%錢小紅
장교%주렴기%전방%장양군%전소홍
磁性颗粒%固定化酶反应器%蛋白质组学%蛋白质酶解
磁性顆粒%固定化酶反應器%蛋白質組學%蛋白質酶解
자성과립%고정화매반응기%단백질조학%단백질매해
研究了以不同粒径的磁性颗粒为载体的固定化酶反应器在蛋白质酶解过程中,其粒径大小对团聚、酶解效率和漏切位点等的影响.实验结果表明,纳米级颗粒的酶负载量为亚微米级的3.5倍左右.但当酶固定量相同时,酶解效率基本相当.而在一定程度上加大磁性颗粒的粒径后,团聚现象得到明显改善.选择磁性载体粒径为20nm的固定化酶反应器,对其性能进一步考察.结果显示胰蛋白酶与牛血清白蛋白(BSA)的质量比为1∶1时,即能于1 min内实现快速酶解;当酶解10 min时,其零漏切位点肽段数和蛋白质序列覆盖率基本达到稳定,并明显优于溶液酶解水平.通过对漏切位点的统计分析比较,发现固定化酶解与溶液酶解时的漏切位点规律基本类似.因此,采用不同粒径磁性载体制备的固定化酶反应器均可在蛋白质组学研究中提供快速、高效的酶解.
研究瞭以不同粒徑的磁性顆粒為載體的固定化酶反應器在蛋白質酶解過程中,其粒徑大小對糰聚、酶解效率和漏切位點等的影響.實驗結果錶明,納米級顆粒的酶負載量為亞微米級的3.5倍左右.但噹酶固定量相同時,酶解效率基本相噹.而在一定程度上加大磁性顆粒的粒徑後,糰聚現象得到明顯改善.選擇磁性載體粒徑為20nm的固定化酶反應器,對其性能進一步攷察.結果顯示胰蛋白酶與牛血清白蛋白(BSA)的質量比為1∶1時,即能于1 min內實現快速酶解;噹酶解10 min時,其零漏切位點肽段數和蛋白質序列覆蓋率基本達到穩定,併明顯優于溶液酶解水平.通過對漏切位點的統計分析比較,髮現固定化酶解與溶液酶解時的漏切位點規律基本類似.因此,採用不同粒徑磁性載體製備的固定化酶反應器均可在蛋白質組學研究中提供快速、高效的酶解.
연구료이불동립경적자성과립위재체적고정화매반응기재단백질매해과정중,기립경대소대단취、매해효솔화루절위점등적영향.실험결과표명,납미급과립적매부재량위아미미급적3.5배좌우.단당매고정량상동시,매해효솔기본상당.이재일정정도상가대자성과립적립경후,단취현상득도명현개선.선택자성재체립경위20nm적고정화매반응기,대기성능진일보고찰.결과현시이단백매여우혈청백단백(BSA)적질량비위1∶1시,즉능우1 min내실현쾌속매해;당매해10 min시,기령루절위점태단수화단백질서렬복개솔기본체도은정,병명현우우용액매해수평.통과대루절위점적통계분석비교,발현고정화매해여용액매해시적루절위점규률기본유사.인차,채용불동립경자성재체제비적고정화매반응기균가재단백질조학연구중제공쾌속、고효적매해.