北京大学学报（医学版）
北京大學學報（醫學版）
북경대학학보（의학판）
JOURNAL OF BEIJING MEDICAL UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2013年
2期
297-302
,共6页
端粒%印迹法,DNA%实时定量聚合酶链反应%地高辛配基%衰老
耑粒%印跡法,DNA%實時定量聚閤酶鏈反應%地高辛配基%衰老
단립%인적법,DNA%실시정량취합매련반응%지고신배기%쇠로
目的:分析并比较测量端粒长度的DNA印迹法和实时定量PCR法在细胞衰老实际研究中的性能.方法:从不同代数(population doublings,PDs)的正常人成纤维细胞(2BS)中提取基因组DNA作为测试样本；对测量端粒长度的DNA印迹法和实时定量PCR法进行优化,以点杂交的方式分析地高辛配基标记检测系统的特异性和灵敏度；分别用两种方法反复测定同一样本的平行样或不同样本并分析比较两种方法测量端粒的分辨率和精确度.结果:实际测量端粒时,地高辛配基标记检测系统虽可检测出小于1 μg的基因组DNA,但最优样本量为4～5 μg；DNA印迹法的分辨率约为150 bp,实时定量PCR法的分辨率约为300～400 bp,前者可分辨代龄相差少至2 PDs的2BS细胞端粒长度的差异,而后者只能分辨代龄相差5 PDs以上的端粒差异；实时定量PCR法重复测量误差超过10％,远大于DNA印迹法的2.5％ (P ＜0.001).结论:地高辛配基标记的DNA印迹检测系统完全适用于测量端粒长度,且性能优于实时定量PCR法,但后者方便快捷,可高通量处理样本,所以在细胞衰老研究中,应根据具体情况合理选择相应方法.
目的:分析併比較測量耑粒長度的DNA印跡法和實時定量PCR法在細胞衰老實際研究中的性能.方法:從不同代數(population doublings,PDs)的正常人成纖維細胞(2BS)中提取基因組DNA作為測試樣本；對測量耑粒長度的DNA印跡法和實時定量PCR法進行優化,以點雜交的方式分析地高辛配基標記檢測繫統的特異性和靈敏度；分彆用兩種方法反複測定同一樣本的平行樣或不同樣本併分析比較兩種方法測量耑粒的分辨率和精確度.結果:實際測量耑粒時,地高辛配基標記檢測繫統雖可檢測齣小于1 μg的基因組DNA,但最優樣本量為4～5 μg；DNA印跡法的分辨率約為150 bp,實時定量PCR法的分辨率約為300～400 bp,前者可分辨代齡相差少至2 PDs的2BS細胞耑粒長度的差異,而後者隻能分辨代齡相差5 PDs以上的耑粒差異；實時定量PCR法重複測量誤差超過10％,遠大于DNA印跡法的2.5％ (P ＜0.001).結論:地高辛配基標記的DNA印跡檢測繫統完全適用于測量耑粒長度,且性能優于實時定量PCR法,但後者方便快捷,可高通量處理樣本,所以在細胞衰老研究中,應根據具體情況閤理選擇相應方法.
목적:분석병비교측량단립장도적DNA인적법화실시정량PCR법재세포쇠로실제연구중적성능.방법:종불동대수(population doublings,PDs)적정상인성섬유세포(2BS)중제취기인조DNA작위측시양본；대측량단립장도적DNA인적법화실시정량PCR법진행우화,이점잡교적방식분석지고신배기표기검측계통적특이성화령민도；분별용량충방법반복측정동일양본적평행양혹불동양본병분석비교량충방법측량단립적분변솔화정학도.결과:실제측량단립시,지고신배기표기검측계통수가검측출소우1 μg적기인조DNA,단최우양본량위4～5 μg；DNA인적법적분변솔약위150 bp,실시정량PCR법적분변솔약위300～400 bp,전자가분변대령상차소지2 PDs적2BS세포단립장도적차이,이후자지능분변대령상차5 PDs이상적단립차이；실시정량PCR법중복측량오차초과10％,원대우DNA인적법적2.5％ (P ＜0.001).결론:지고신배기표기적DNA인적검측계통완전괄용우측량단립장도,차성능우우실시정량PCR법,단후자방편쾌첩,가고통량처리양본,소이재세포쇠로연구중,응근거구체정황합리선택상응방법.
