中国医药工业杂志
中國醫藥工業雜誌
중국의약공업잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACEUTICALS
2013年
4期
344-347
,共4页
王颖秋%郑林冲%谢丽萍%朱宝泉%胡又佳
王穎鞦%鄭林遲%謝麗萍%硃寶泉%鬍又佳
왕영추%정림충%사려평%주보천%호우가
头孢菌素C酰化酶%易错PCR%体外进化%头孢菌素C%7-氨基头孢烷酸
頭孢菌素C酰化酶%易錯PCR%體外進化%頭孢菌素C%7-氨基頭孢烷痠
두포균소C선화매%역착PCR%체외진화%두포균소C%7-안기두포완산
以前期工作中获得的一个可以直接转化头孢菌素C (CPC)为7-氨基头孢烷酸(7-ACA)的CPC酰化酶为基础,采用易错PCR,引入不同浓度的Mg2+和Mn2+,所得易错PCR产物经克隆、转化后进行初筛,共筛选了400株转化子,其中有35株酶活力得到提高.采用金属螯合亲和色谱法分离得到纯酶后再进行复筛,其中一株酶活力显著提高,转化率提高约35％.测序结果显示,该CPC酰化酶突变蛋白的编码序列中有两个碱基发生突变,使得第122位的丙氨酸被替换为缬氨酸.在最适条件下,该酶催化CPC生成7-ACA的转化率为95％.
以前期工作中穫得的一箇可以直接轉化頭孢菌素C (CPC)為7-氨基頭孢烷痠(7-ACA)的CPC酰化酶為基礎,採用易錯PCR,引入不同濃度的Mg2+和Mn2+,所得易錯PCR產物經剋隆、轉化後進行初篩,共篩選瞭400株轉化子,其中有35株酶活力得到提高.採用金屬螯閤親和色譜法分離得到純酶後再進行複篩,其中一株酶活力顯著提高,轉化率提高約35％.測序結果顯示,該CPC酰化酶突變蛋白的編碼序列中有兩箇堿基髮生突變,使得第122位的丙氨痠被替換為纈氨痠.在最適條件下,該酶催化CPC生成7-ACA的轉化率為95％.
이전기공작중획득적일개가이직접전화두포균소C (CPC)위7-안기두포완산(7-ACA)적CPC선화매위기출,채용역착PCR,인입불동농도적Mg2+화Mn2+,소득역착PCR산물경극륭、전화후진행초사,공사선료400주전화자,기중유35주매활력득도제고.채용금속오합친화색보법분리득도순매후재진행복사,기중일주매활력현저제고,전화솔제고약35％.측서결과현시,해CPC선화매돌변단백적편마서렬중유량개감기발생돌변,사득제122위적병안산피체환위힐안산.재최괄조건하,해매최화CPC생성7-ACA적전화솔위95％.
